TnT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System
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TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System ( TNT® SP6 麦胚高产率蛋白表达系统 ) 是一种基于优化的麦胚提取物，在单管内进行的偶联转录/ 翻译系统，可在两个小时之内表达蛋白。生成的蛋白浓度在 10-100μg/ml 之间，可以用于多种基于蛋白质组学方面的研究，也可以用于高通量分析。
除质粒 DNA 或 PCR 模板外，麦胚提取物提供转录/ 翻译过程所需的全部成分。蛋白标记试剂由使用者自行提供。
| 产品名称 | 规格 | 目录号 | 目录价 | 促销价 |
| TNT® SP6 High-Yield Protein Expression System | 40 reactions | L3260 | ￥5621 | 无 |
| TNT® SP6 High-Yield Protein Expression System | 10 reactions | L3261 | ￥1748 | 无 |
组分列表
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L3260
TNT® SP6 High-Yield Protein Expression System
组分名称 规格 组分号 TnT® SP6 High-Yield Wheat Germ Master Mix 4 × 300μl L326A Nuclease-Free Water 1 × 1,250μl P119A -
L3261
TNT® SP6 High-Yield Protein Expression System
组分名称 规格 组分号 Nuclease-Free Water 1 × 1,250μl P119A TnT® SP6 High-Yield Wheat Germ Master Mix 1 × 300μl L326A
说明书
相关资源
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Q:各类无细胞表达系统的对比，如何选择？
+查看详情Promega提供的各种无细胞表达系统对比如下：
无细胞表达系统
系统类型
目录号
推荐模板
每50 ul反应的蛋白产量
每ml反应体系的蛋白产量
合成蛋白的分子量范围
推荐的Promega 载体
试剂盒中
提供的对照
RNA
质粒
PCR
S30 T7 High-Yield Protein Expression System
原核-大肠杆菌
L1110
L1115
-
++
ND
10-25 ug
0.2-0.5 mg
11kDa-116 kDa
pFN6A (C8511)
pFN6K (C8521)
L112A
S30 T7 Control DNA
TNT® Coupled Reticulocyte Lysate System
真核-兔网织红细胞
L4600
L4601
L4610
L4611
L4950
L5010
L5020
+
+++
++
150-300 ng
3 - 6 ug
9.6kDa-254 kDa
pTnT (L5610)
pCMVTNT (L5620)
L4741 (SP6)
L4821 (T7)
L494A (T3)
TNT® Quick Coupled Transcription/ Translation System
L1170
L1171
L2080
L2081
+
+++
++
L4741 (SP6)
L4821 (T7)
TNT® T7 Quick for PCR DNA
L5540
+
+
+++
无
不含
TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System
真核-麦胚
L3260
L3261
+
+++
+++
0.5-5 ug
10-100 ug
pF3A WG (L5671)
pF3K WG (L5681)
不含
TNT® T7 Insect Cell Extract Protein Expression System
真核-昆虫
L1101
L1102
+
+++
ND
0.75-3.7 ug
15-75 ug
pF25A T7 (L1061)
pF25K T7 (L1081)
L105B
Luciferase ICE T7 Control DNA
无细胞表达产品选择原则：
1. 不同来源的无细胞表达产品对于要表达的蛋白的种属来源并没有限制：例如表达原核蛋白，既可以选择原核的大肠杆菌系统，也可以选择三类真核无细胞表达系统（兔网织红细胞、麦胚或昆虫系统），反之亦然。
2. 如果希望蛋白的表达环境更接近目的蛋白的天然表达环境，则可选择相应系统：例如表达植物蛋白，可以选择麦胚系统；表达哺乳动物蛋白，可以选择兔网织红细胞系统。
3. 如果下游应用对蛋白产量要求比较高，推荐使用大肠杆菌和麦胚高产系统。
4. 麦胚系统和昆虫系统推荐使用Promega分别专为这两个系统优化的载体做模板，如果已有现成适用于无细胞表达的载体而不希望新构建，可以考虑选择兔网织红细胞系统或大肠杆菌系统，部分产品可以使用PCR产物作为模板。
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Q:使用无细胞表达系统有哪些注意事项？
+查看详情使用无细胞蛋白表达系统的一般注意事项：
1. 使用无核酸酶的耗材，注意无RNase操作；
2. 使用去内毒素的质粒，并提高质粒的浓度，降低加入质粒的体积，以减少引入其他反应抑制因子；
3. 加入质粒模板要适量，不是越多越好；
4. 每次试验要做对照（阴性对照、阳性对照）；
5. 操作试剂要轻柔；
6. 禁止反复冻融试剂（干冰运输），使用时第一次解冻后将裂解物/提取物按单次用量分装，不要冻融超过两次；
7. 建议用Western Blot或标记的方法检测；
8. 电泳上样量：1-2μl无细胞表达产物。
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Q:无细胞表达系统的产物如何检测？
+查看详情无细胞表达系统的蛋白产量与在培养的大肠杆菌中的蛋白表达产量相比要低很多，不是所有系统的产物都可以通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色检测到，我们建议您用灵敏度更高的Western Blot或各种标记方法检测（建议电泳上样量：1-2ul无细胞蛋白表达产物）：
1. 如有蛋白特异性抗体，或者蛋白带标签，可用标签抗体，进行Western Blot检测。
2. 如无合适的抗体，可以在合成蛋白的同时给蛋白带上标记，通过标记检测，例如在合成体系中加入带硫35标记的甲硫氨酸，可以通过放射自显影检测。Promega提供以下两种不同的非放射性标记方式，分别是荧光标记和生物素标记，其检测方法可达到与放射自显影同等的灵敏度：
1）FluoroTect™ GreenLys in vitro Translation Labeling System (L5001)：带绿色荧光标记的赖氨酸tRNA，加入无细胞表达体系中反应，新合成的蛋白上即带有绿色荧光标记，可在SDS-PAGE后，直接通过荧光凝胶成像检测。
2）Transcend™ tRNA (L5061)：带生物素标记的赖氨酸tRNA，加入无细胞表达体系中反应，新合成的蛋白上即带有生物素标记，可用Transcend™ Non-Radioactive Translation Detection Systems (L5070/L5080)，通过显色法或化学发光法进行检测。
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Q:无细胞表达系统的产物是纯蛋白吗？是否需要进行蛋白纯化？
+查看详情无细胞表达系统是基于不同类型细胞裂解物制备的，体系中包含细胞裂解物当中大量的内源蛋白，因此在无细胞表达系统中新合成的蛋白是存在于蛋白混合物中的，并非纯蛋白。
如果下游应用需要使用纯化的蛋白，则需要进行蛋白纯化，可以选择在表达蛋白时带上合适的标签，通过标签进行蛋白纯化。如果下游应用是做蛋白相互作用研究，如免疫共沉淀、GST pull-down等，或是某些蛋白活性的检测，则无需纯化，直接进行下游实验即可。
