mRNA疗法解决方案
我们开发了一系列产品和服务，旨在支持您的mRNA疗法工作流程的每个阶段，涵盖从研发到生产。这些解决方案旨在满足高质量标准、不同规模需求及法规要求。
mRNA生产
我们支持mRNA疗法生产的解决方案涵盖了完整的工作流程，包括模板质粒DNA的构建、通过体外转录（IVT）进行的mRNA生产，以及RNA纯化。此外，我们还为那些希望与经验丰富的制造商合作的公司提供定制和符合cGMP标准的生产选项。
探索针对以下方面的解决方案：模板DNA制备 | 体外转录 | RNA纯化
模板DNA制备
用于体外转录的模板DNA可以包括线性化的质粒DNA、合成的DNA以及PCR产物。请查看用于模板DNA制备的缓冲液、试剂、限制性内切酶、PCR酶和试剂盒，以及DNA提取产品。
模板DNA必须去除杂质，如细菌内毒素、反应组分及残留污染物。ReliaPrep™ DNA Clean-Up and Concentration System旨在快速浓缩并纯化稀释的DNA溶液，以及提取和纯化100bp至10kb大小的DNA片段。Wizard® SV Gel and DNA Clean-Up System用于从琼脂糖凝胶中或直接从PCR扩增反应中提取和纯化DNA片段。
如何制备体外转录用的模板
体外转录（IVT）
RiboMax™ RNA生产系统提供了进行体外mRNA合成所需的所有组分和缓冲液，包括RQ1无RNase的DNase，用于IVT反应后消化模板DNA。
T7 RiboMAX™ Express大规模RNA生产系统是一种为短时间内稳定生产大量RNA而设计的IVT系统。使用该试剂盒已成功生成了高达14kb的毫克级高质量RNA转录本。
RiboMAX™大规模RNA生产系统能够合成长达23kb的带帽或不带帽的大规模RNA转录本，并且可以在转录产物中掺入修饰核苷酸。
了解更多关于IVT产品的信息。
T7 RiboMAX™ Express 大规模 RNA 生产系统的工作原理
RiboMAX™ 体外转录反应产生的RNA产量可扩展到至少10ml。图示为每ml IVT反应的产量（左图）和总产量（右图）。每个重复的RiboMAX™ 反应以单独的柱状图表示。按照上文工作流程图中描述准备RiboMAX™ IVT反应。使用T7线性对照DNA（目录号P141A）作为模板（每反应100μg/ml），分别准备了双份的100μl、1ml、5ml和10ml反应。另外，还准备了双份无RNA聚合酶的对照（0.1ml – NE）。转录反应在37°C下孵育4小时。转录后，将RiboMAX™ 反应液稀释100倍于无核酸酶水，并使用Qubit™ RNA BR Assay（Invitrogen）对10μl样品进行测定，以评估RNA产量。
符合cGMP标准及无动物源的IVT试剂
您的mRNA生产工作是否需要大量、特殊配方或根据特定需求定制的产品尺寸及规格？了解我们为治疗性mRNA生产提供的原材料信息。
大规模IVT试剂盒比较。使用RiboMAX™ 大规模RNA生产系统-T7、HiScribe™ T7高产RNA合成试剂盒和TranscriptAid™ T7高产转录试剂盒合成了1.8kb的萤光素酶转录本和5kb末端终止转录本，转录反应中含有标准核苷酸（Std.）、N1-甲基假尿苷（U）及N1-甲基假尿苷+5-甲基胞苷（U+C）。转录过程中使用CleanCap® Reagent AG（3’ OMe）进行共转录加帽反应，遵循此处描述的实验方案。左侧：转录产物按1:100的比例稀释于无核酸酶水中，并使用RNA ScreenTape Assay进行分析。展示了使用各试剂盒合成的转录产物的凝胶图像。条带按各泳道最高峰进行缩放（按样本缩放）。右侧：使用柱式RNA纯化试剂盒纯化1.8kb转录本，并采用QuantiFluor® RNA System（目录号E3310）进行定量。展示的是纯化后的1.8kb转录本浓度及产量结果。
mRNA纯化
体外转录（IVT）反应之后，需要将mRNA从反应混合物中纯化出来，以防止反应组分对下游mRNA应用产生抑制。纯化过程同时也浓缩了mRNA。ProNex® 分子量选择性纯化系统是一种基于磁珠的技术，可以提供一种简便、快速、高效且便于自动化的方法来进行RNA纯化。
两种磁珠法RNA纯化化学体系的平行比较。使用50ul预纯化的RNA，依据生产商推荐的实验方案，分别采用ProNex® 分子量选择性纯化系统和一种竞争性试剂盒进行纯化。
mRNA分析表征与质控检测
mRNA疗法的研发和生产需要严格的分析表征和质量控制（QC）检测，以确保最终产品的安全性、有效性和质量。这些检测在mRNA治疗制剂的整个生命周期中各个阶段都至关重要，从研发到生产和质量控制。我们提供一系列产品，支持对mRNA质量进行严格测量，确保mRNA疗法开发的最优成果。
探索针对以下方面的解决方案：杂质检测 | 定量分析 | 身份鉴定 | 效力与功能测定
杂质检测
体外转录（IVT）反应中常见的一种杂质是副产物——双链RNA（dsRNA）。dsRNA具有高度免疫原性，能被多种细胞内或内体传感器检测到，从而引发炎症、翻译抑制及细胞死亡。因此，检测并最大限度减少用于治疗的mRNA中dsRNA的含量至关重要。现有方法在检测混合溶液中dsRNA时缺乏定量能力和敏感性。
我们已经开发了两种利用生物发光进行dsRNA检测和定量的新型检测系统：Lumit® dsRNA检测试剂盒和TLR3报告生物测定。
Lumit® dsRNA检测试剂盒的原理。该试剂盒利用基因工程将dsRNA结合域（DRBDs）与SmBiT和LgBiT融合来检测dsRNA。dsRNA上的BiT-DRBDs二聚化促使NanoBiT®萤光素酶的互补并产生光。
TLR3生物活性测定的原理。该方法用来测定旨在激活TLR信号传导的激动剂的效力和稳定性。使用TLR激动剂处理会导致启动子驱动的发光，这种发光可以通过Bio-Glo-NL™试剂进行检测和定量。
定量分析
对mRNA进行精确的定量对于治疗应用至关重要。我们提供了可与高灵敏度检测仪器配合使用的荧光RNA检测试剂，适用于单个样品或微孔板检测。
- 用于溶液中微量RNA（100pg）定量的荧光RNA结合染料
- 可在GloMax®仪器上使用微孔板上或Quantus™荧光计上使用单管进行检测
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身份鉴定
在mRNA疗法和疫苗的生产过程中，无论是模板DNA的创建阶段还是最终mRNA产品的鉴定阶段，确认序列都是至关重要的。Sanger测序提供了精确性、简单的工作流程、可扩展性以及持续的可重复性，这对于维持一致的检测并确保最终产品的安全性至关重要。
Spectrum Compact CE系统是一款集成型高效的小型台式仪器，使您能够在自己的实验室中自主进行Sanger测序和片段分析，完全在您的掌控之下，并且操作便捷。
效力
“效力”指的是所生产的mRNA在特定剂量下引发预期治疗效果的能力。效力可以通过多种方式来确定。
体外翻译
体外翻译常用于表征mRNA产品。经核酸酶处理的兔网织红细胞裂解体系和小麦胚芽提取物均含有为翻译优化的能量再生系统，可直接用于mRNA的体外翻译。这两种体系都已证明能够利用带帽mRNA（含或不含修饰核苷酸）生成全长蛋白质。
Transcend™ tRNA是一种预加载带生物素标记赖氨酸的tRNA，可用于体外翻译系统中，通过对蛋白质进行标记以实现非放射性的检测。
了解更多关于体外翻译试剂的信息。
功能测定
我们提供了一系列基于高灵敏度生物发光技术开发的功能性测定。这些检测包括了萤光素酶报告基因测定、简便的无需洗涤的免疫测定、酶活性及结合测定等多种类型。
了解更多关于功能性生物测定的信息。
定制效力测定开发
我们的生物活性测定开发和服务涵盖了新方法的开发、现有方法的修改、生物活性测定的优化与验证、大分子药物特性分析以及定制细胞制造等。
