NanoBiT® PPI Starter Systems

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NanoLuc® Binary Technology ( NanoBiT® ) 是一种基于 NanoLuc® 萤光素酶的二亚单元系统,可用来检测活细胞内蛋白质的相互作用。NanoBiT® 系统由两个小单元组成,Large BiT ( LgBiT;18 kDa ) 和 Small BiT ( SmBiT;11 氨基酸肽 ) 两个部分分别融合待测蛋白。LgBiT 和 SmBiT 两个亚单元具有最佳的稳定性和最小限度的自我聚合。如两个待测蛋白存在相互作用,LgBiT 会和 SmBiT 结构互补从而得到一个明亮的萤光素酶。

NanoBiT® PPI Starter System 提供构建 LgBiT 和 SmBiT 融合蛋白所需的载体,一对相互作用的阳性对照蛋白对 PRKACA : PRKAR2A 的载体和一个阴性对照载体。Starter 系统还包括 Nano-Glo® Live Cell Assay System,一个一步加样、非裂解型检测试剂,用于监测活细胞的 NanoBiT® 萤光素酶活性。试剂是由 Nano-Glo® LCS Dilution Buffer 稀释 Nano-Glo® Live Cell Substrate 来制备 Nano-Glo® Live Cell Reagent。底物和缓冲液都经过优化,能够在不论有或无血清的情况下都提供加强的稳定性和的降低自发光,能够增加检测低水平的 NanoBiT® 萤光素酶的敏感性。FKBP : FRB 对可单独购买,作为诱导型的阳性对照,其表达由 HSV-TK 启动子驱动,在哺乳动物细胞中组成型低水平表达。


关键词:蛋白互作,活细胞检测,NanoBiT酶,融合蛋白载体,NanoLuc底物


Promega公司拥有NanoLuc®萤光素酶(又称NanoLuc®荧光素酶)及底物相关专利。

NanoLuc®萤光素酶专利如下:

专利号:ZL 2010 8 0019477.4;专利公告号:102459579

NanoLuc®萤光素酶底物(Furimazine)的专利如下:

专利号:ZL 2011 8 0063659.6;专利公告号:103443121

专利号:ZL 2011 8 0062485.1;专利公告号:103370319

注意:使用NanoLuc®产品,研究人员需同意接受本有限使用商标许可条款(LULL)的约束,否则视为侵犯专利权。

使用 NanoBiT® MCS Starter System,您可以通过传统多克隆位点 ( MCS ) 的克隆方法构建 N 端和 C 端的 LgBiT 和 SmBiT 融合蛋白,也可以使用一个基于两个稀有酶切位点限制酶 Sgfl 和 Pmel 的定向克隆方法 - Flexi® Vector Cloning System 生成 N 端和 C 端 LgBiT 和 SmBiT 的融合蛋白,这是一种快速有效高保真的方法,能在 Flexi® Vectors 间转移蛋白基因编码区而不需要重新测序。


特点:

• 灵敏度更高:明亮的信号和降低背景提高了灵敏度,信噪比和动态范围。

• 更准确的 PPI 生物模型:小蛋白标签和接近生理条件的低水平表达让人工干扰最小化;可在活细胞进行实时动力学分析。

• 精确测量动态相互作用:尽可能小的标签让 LgBiT 自发的降低了相互组合的亲和力;互补作用可逆,能用来精确分析蛋白质的结合和解离。

• 检测更简单:明亮发光信号输出,无需特定滤片或进样器。

• 可轻松调整放大实验通量:实验可以从工作台手工操作到高通量 HTS,最高至 1536 孔板的检测通量;检测试剂稳定性高,适用于手动加样操作。

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