CheckMate™/Flexi® Vector Mammalian Two-Hybrid System
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CheckMate™/Flexi® Vector Mammalian Two-Hybrid System ( CheckMate™/Flexi® 哺乳动物双杂交系统 ) 提供一种手段,可用于确定、印证和研究两种蛋白或结构域间可能的相互作用,也可用于构建稳定的细胞系进行基于细胞的检测。哺乳动物来源的目标蛋白,系统可在模仿细胞自然环境的情况下表达并进行翻译后修饰。在酵母双 杂交系统中,目标蛋白 (" X ") 与 DNA 结合结构域区融合,另一蛋白 (" Y ") 与转录激活结构域融合。
CheckMate™/Flexi® 哺乳动物双杂交载体系统区别于以前的 CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统,可与 Flexi® 载体系统兼容,使得在不同的 Flexi® 载体间直接克隆和迅速有效的高保真转移蛋白编码区成为可能。
该系统基于三种质粒共转染入哺乳动物细胞,每种质粒皆有独一无二的特点。 pFN10A (ACT) Flexi® Vector 在克隆位点上游含有疱疹单病毒 VP16 的转录激活结构域;pFN11A (BIND) Flexi® Vector 在克隆位点上游含有酵母 GAL4 DNA 结合结构域,并且在 SV40 启动子的调控下可表达海肾萤光素酶,可用于校准转染效率的不同。
第三个质粒,pGL4.31[luc2P/Gal4UAS/Hygro] Vector,含有五个位于最小 TATA 盒上游的 GAL4 结合位点,该位点位于萤火虫萤光素酶基因上游,作为蛋白 X 与蛋白 Y 相互作用的报告基因。
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