效力检测_慢病毒转导工具_基因治疗_应用_Promega微网站-普洛麦格(北京)生物技术有限公司

慢病毒转导工具

Lentivirus Tools

Promega提供一种新型的p24免疫测定法、T细胞重定向慢病毒过程中活性检测工具以及广泛的有关慢病毒表征与分析的基因组学实验方案。

T细胞重定向慢病毒过程中效力检测
In-Process Potency Testing of T Cell Redirecting Lenti-CAR Virus

慢病毒载体常用于在T细胞和其他免疫细胞中传递和表达嵌合抗原受体(CAR)。我们将已做适应调整的T Cell Activation Bioassay方案用于基于作用机制的Lenti-CAR病毒过程中活性检测。Lentivirus Bioassay具有高特异性、灵敏度和可重复性,并且仅需要极少的实验操作时间。该检测方法对稳定性具有指示能力,可轻松适用于不同的Lenti-CAR病毒,以便靶向不同的肿瘤抗原。



CAR在有NFAT-萤光素酶报告蛋白的TCR/CD3效应细胞表面表达。当CAR与靶细胞上的抗原结合,发光信号会根据信号传导强度激发。


TCR/CD3效应细胞在96孔板中与CAR慢病毒共同孵育。孵化24至48小时后,加入表达抗原的靶细胞。诱导6小时,加入Bio-Glo™Substrate,并测定发光信号。

Lentivirus Bioassay特异性数据

Lentivirus Bioassay具有特异性

用系列稀释的CAR-19或GFP慢病毒转导TCR/CD3效应细胞。48小时后,加入Raji靶细胞(CD19+),诱导6小时后测定发光信号。只有用CAR-19慢病毒转导的TCR/CD3效应细胞对Raji靶细胞有反应。
用系列稀释的CAR-19慢病毒转导TCR/CD3效应细胞。48小时后,加入Raji靶细胞或CD19敲除的Raji靶细胞,诱导6小时后测定发光信号。对靶细胞的反应在敲除抗原后消失,证明了该检测的特异性。

Lentivirus Bioassay稳定性数据

Lentivirus Bioassay对稳定性具有指示能力



通过在37℃下孵育2至48小时,制备CAR-19慢病毒的强制降解样品,然后通过TCR/CD3效应细胞和Raji靶细胞进行分析。该检测试验表明,慢病毒活性随着热处理时长增加而降低,表现为EC50升高和最大反应程度降低。

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