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本期我们为您整理了Promega体外转录技术用于生产其他病毒RNA的高分文章。
RiboMAX™ 体外转录系统非常适用于需要合成大量RNA的研究中,可以合成加帽RNA,同样提供了T7和SP6两种系统供选择。
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Promega拥有市场上第一个商品化的RNA体外转录试剂盒。
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产品被众多高分文章引用,适用于RNA分析的多种应用。
专业
可合成加帽RNA,适用于大量RNA合成,以及其他丰富的体外转录系统可供选择。
文献1
使用许可的减毒活黄病毒疫苗作为骨架开发嵌合寨卡疫苗
影响因子:14.919
发表时间:2018.2.14
中文摘要
寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的全球传播及其与先天性缺陷的意外关联,使得我们急需开发一种安全有效的疫苗。作者报道了一种表达寨卡病毒prM-E蛋白的重组嵌合寨卡病毒候选疫苗(称为ChinZIKV)的开发和特性,该疫苗用已获批准的日本脑炎减毒活疫苗SA14-14-2为基因骨架。ChinZIKV在体外保持复制活性和遗传稳定性,同时在多种动物模型中表现出衰减表型。值得注意的是,单剂量ChinZIKV免疫小鼠和恒河猴引起了稳健和持久的免疫应答,并对ZIKV的挑战提供了完全的保护。并且,免疫ChinZIKV的雌性小鼠在怀孕期间对ZIKV挑战导致的胎盘和胎儿损伤有保护作用。作者的研究为应对寨卡病毒的紧急情况提供了一个替代的疫苗平台,ChinZIKV的安全性、免疫原性和保护特性值得进一步的临床开发。
作者以线性化的pChinZIKV质粒DNA作模板,使用Promega RiboMAX™ Large Scale RNA Production System—SP6(P1280)系统,通过体外转录反应合成了带5'帽子结构的嵌合寨卡病毒RNA,经纯化的RNA转录本转染入BHK-21细胞,以获得病毒用于后续的表征。作者还将体外转录合成的纯化的病毒RNA作为RT-qPCR检测的标准品,用于标准曲线的绘制和样品中病毒RNA拷贝数的计算。
原文链接:https://www.nature.com/articles/s41467-018-02975-w
文献2
流感病毒RNA合成过程中核糖核蛋白复合物的超微结构
影响因子:6.268
发表时间:2021.6.9
中文摘要
甲型流感病毒的单链负义病毒基因组RNA(vRNA)被病毒核蛋白和RNA聚合酶包裹,形成螺旋杆状结构的核糖核蛋白复合物(virus ribonucleoprotein complex,vRNP)。vRNP负责vRNA的转录和复制。然而,RNA合成过程中vRNP的构象尚不清楚。文中作者结合高速原子力显微镜(HS-AFM)和冷冻电子显微镜(cryo-EM)两种技术,研究了在体外RNA合成过程中甲型流感病毒vRNP的天然结构。作者的发现提供了RNA合成过程中vRNP的超微结构特征。
作者使用Promega RiboMAX™ Large Scale RNA Production System—T7(P1300)系统,通过体外转录反应合成了甲型流感病毒PR8毒株RNA的NP和NA片段,以及甲型流感病毒(A/WSN/33毒株)的全部8个基因组RNA片段,经过纯化的RNA产物作为凝胶电泳的标准品,用于评估在体外反应中新合成的RNA的分子量大小(如下图最左侧泳道T7所示)。
原文链接:https://www.nature.com/articles/s42003-021-02388-4
文献3
残翅病毒的重叠感染排斥取决于序列一致性,而不是获得病毒的顺序
影响因子:10.302
发表时间:2021.6.30
中文摘要
寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)的全球传播及其与先天性缺陷的意外关联,使得我们急需开发一种安全有效的疫苗。作者报道了一种表达寨卡病毒prM-E蛋白的重组嵌合寨卡病毒候选疫苗(称为ChinZIKV)的开发和特性,该疫苗用已获批准的日本脑炎减毒活疫苗SA14-14-2为基因骨架。ChinZIKV在体外保持复制活性和遗传稳定性,同时在多种动物模型中表现出衰减表型。值得注意的是,单剂量ChinZIKV免疫小鼠和恒河猴引起了稳健和持久的免疫应答,并对ZIKV的挑战提供了完全的保护。并且,免疫ChinZIKV的雌性小鼠在怀孕期间对ZIKV挑战导致的胎盘和胎儿损伤有保护作用。作者的研究为应对寨卡病毒的紧急情况提供了一个替代的疫苗平台,ChinZIKV的安全性、免疫原性和保护特性值得进一步的临床开发。
作者使用Promega RiboMAX™ Large Scale RNA Production System—T7(P1300)系统,通过体外转录反应合成残翅病毒RNA,经纯化后的病毒RNA用于蜂蛹的注射。作者还使用Promega T7 RiboMAX™ Express RNAi System(P1700)系统,利用退火形成双链的DNA寡核苷酸为模板,通过体外转录反应合成siRNA用于RNAi研究。
原文链接:https://www.nature.com/articles/s41396-021-01043-4
文献4
结构表位模拟物的开发:HCV疫苗设计的独特型方法
影响因子:7.344
发表时间:2021.1.8
中文摘要
丙肝病毒疫苗的开发受到HCV病毒高度遗传多样性和包膜糖蛋白变异性的阻碍,克服这一问题的策略之一是鉴定出保守的、功能上重要的区域,如广泛中和抗体(broadly neutralizing antibodies,bNAbs)的抗原表位,并将其作为基于结构的疫苗设计的基础。文中作者报道了一种抗独特型方法,产生模拟HCV E2上高度保守中和表位的抗体。一种通过诱变筛选出的抗体被命名为B2.1 A,它与bNAb AP33的结合特征与原始抗原非常相似。通过蛋白晶体学证实B2.1 A是AP33抗原表位的结构模拟物。当作为免疫原使用时,B2.1 A诱导的抗体与AP33识别相同的表位和E2残基,更重要的是,该抗体在小鼠模型中可以抵抗HCV的攻击。
作者使用Promega T7 RiboMAX™ Express Large Scale RNA Production System(P1320)系统,通过体外转录反应合成HCV基因组RNA,通过电转将RNA转入Huh7.5细胞中,获得具有感染性的丙肝病毒,并用于后续的抗体中和试验。
原文链接:https://www.nature.com/articles/s41541-020-00269-1
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产品信息(点击查看)
RiboProbe® Systems
提供了T7, SP6, T3 或组合RNA聚合酶选择,主要被用于高特异性的放射性标记的RNA探针
RiboMAX™ Systems
产量大约是Riboprobe系统的10-20倍,用于各种需要合成大量RNA的研究中,可以合成加帽RNA,同样提供了T7和SP6两种系统供选择。
T7 RiboMAX Express
和RiboMAX系统类似,但是以预混液形式提供,操作更方便,合成更加快速,产量更高,但预混系统不能用于加帽RNA或者带标记RNA的合成。
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