NanoLuc®生物发光成像（BLI）简介
● Nluc分子量小，产生明亮的发光信号，不依赖于ATP，在细胞内和细胞外都有活性。
● 与基于FLuc/萤光素的生物发光完全正交。
● 发出蓝色发光信号。
● Furimazine的溶解性和 PK （药代动力学）方面存在挑战。
01
体内Antares
● Antares是NLuc与CyOFP的融合体，加入NLuc底物，会发出明亮的橙色生物发光1。
● 与Furimazine相比，FFz在给药途径上具有更大的灵活性，可以使用更高的剂量。
● FFz具有更强的信号、更好的溶解度和药代动力学特性（PK）。
02
FFz/Antares+AkaLumine/AkaLuc多重检测
FFz能有效实现临床前动物模型的生物发光成像。
● 可以通过非侵入性成像方法跟踪基因表达、细胞生长、迁移和其他生物事件。
● 与基于萤火虫的系统形成优异的多重检测，例如AkaLuc/AkaLumine（通常先后给药）。
03
FFz适合冻干处理
初始液体制剂：
● 固体底物加入有机溶剂溶解，然后用含添加剂的缓冲液稀释。
新Promega制剂：
● 底物用泊洛沙姆溶解并与其混合均匀；将混合溶液冻干成可储存的固体。
最终制剂中不含有机溶剂。
04
FFz的稳定性
● FFz冻干成饼块时，在-80℃温度下保存，保质期较长。
● 复溶后，建议使用者当天用完。
05
NanoLuc/FFz BLI的其他示例
● NLuc经基因工程改造，可实现钙流和其他生物传感器在体内的使用3。
● 使用FFz/RFP-NLuc追踪外泌体—其他有效的能量受体5。
● 未融合的NLuc常用于与病毒融合— SARS-CoV2 NLuc体内成像4。
06
FFz给药途径与自发光
● 在华盛顿大学进行的一项委托研究—将4T1/Nluc-P2A-Fluc原位移植入BALB/c小鼠的#3乳腺脂肪垫。
● 分别通过腹腔注射和静脉注射将FFz注入荷瘤小鼠和对照小鼠，并与FLuc/luciferin对比。
● 注射部位均有可变且明显的自发光信号，但未融合NLuc的发光信号较强。
07
CFz在中枢神经系统的分布优于FFz
● Fz的分布特性与报道的Vgat在大脑前部表达的文献中的特性一致。
● 虽然FFz和其他苯胺具有优异的溶解度和外周BLI性能，但出乎意料地发现在大脑的其他部位发出发光信号。
● CFz作为一种明亮、可配制的具有适当脑分布特性的底物被筛选得到。
08
结论
● FFz表现出良好的生物分布特性，能够进行制造、配制，并且易于被最终使用者复溶和注射。
● 已发表的示例证明了该底物的通用性，可用于各种基于NLuc的BLI实验。
● 在其他实验中，CFz9是中枢神经系统BLI的首选底物，但不能替代FFz。
● NLuc/FFz是所有FLuc/Luciferin系统的首选多重检测组合。
1Chu, J., et al. Nat Biotech. 2016, 34, 760-767.
2Su, Y., et al. (2020). "Novel NanoLuc substrates enable bright two-population bioluminescence imaging in animals." Nature Methods 17: 852-860.
3Oh, Y., et al. (2019). "An orange calcium-modulated bioluminescent indicator for non-invasive activity imaging." Nature Chemical Biology 15(5): 433-436.
4Xie, X., et al. (2020). "A nanoluciferase SARS-CoV-2 for rapid neutralization testing and screening of anti-infective drugs for COVID-19." Nature Communications 11(1): 5214.
5Perez, G.I. et al. (2022). “In vitro and in vivo analysis of extracellular vesicle-mediated metastasis using a bright, red-shifted bioluminescent reporter protein.” Adv. Genet. 3, e2100055.
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