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文末有奖 | 告别假阳性:HiBiT双报告基因系统,让靶蛋白调控数据更可靠

Nano-Glo® HiBiT Dual-Luciferase® 报告基因系统
同一样品,双重读值
告别假阳性
在研究靶向蛋白降解(TPD)或信号通路调控时,您是否经常遇到这样的困扰:检测到目标蛋白水平下降,却无法确定这究竟是特异性降解所致,还是源于孔间差异、转染效率不均、或化合物的细胞毒性?传统方法需要额外设立对照孔、平行实验,既浪费珍贵样品,又增加了二次筛选的负担。
Promega最新推出的Nano-Glo® HiBiT Dual-Luciferase® 报告基因系统(HiBiT NanoDLR™)为您提供更简洁的解决方案。 该系统采用简单的“加样-读取-加样-读取”工作流程,在同一孔中依次定量检测萤火虫萤光素酶(Fluc)和 HiBiT 标记的目标蛋白。通过将 HiBiT 标记的靶蛋白与组成型表达的 Fluc 共表达,Fluc 信号可作为内置的同孔归一化对照,帮助您清晰区分:究竟是靶蛋白受到了特异性调控,还是由于全局蛋白表达变化或细胞活力下降所导致的非特异性效应。

4大核心优势
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同一样品,两种读值:在同一份样品中对HiBiT标签蛋白和萤火虫萤光素酶进行多重检测;
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内置同孔归一化:萤火虫萤光素酶可指示细胞活力或蛋白表达的整体变化,减少假阳性结果并降低二次筛选负担;
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适用于自动化与高通量筛选:稳定的辉光型信号动力学支持批量处理,并可直接整合至高通量筛选工作流程及多孔板检测体系中;
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独特的灵敏度与宽动态范围:可对低丰度至高丰度蛋白进行定量检测,两种报告基因均具有线性响应曲线。
主要应用
靶蛋白降解(PROTAC 药物发现) 、机制研究、基因调控与功能研究、高通量筛选(HTS)、分泌蛋白或表面蛋白检测......


工作流程

在加入补充了 LgBiT 的 ONE-Glo™ EX 试剂后,首先检测萤火虫萤光素酶 (Fluc) (1)。然后将 NanoDLR™ Stop & Glo® 试剂加入细胞中,以同时淬灭萤火虫萤光素酶信号并检测现已互补重构的 NanoBiT® (HiBiT + LgBiT) 信号 (2)。


应用数据
使用 Fluc 信号区分化合物对蛋白质水平的特异性和非特异性效应



两种PROTACs选择性降解HiBiT-BRD4与一般细胞毒性的比较。用弱TK启动子驱动表达HiBiT-BRD4-IRES-luc2盒的构建体瞬时转染HEK293细胞。在用滴定浓度的MZ1(图A)、dBET1(图B)或星形孢菌素(图C)处理细胞后,使用裂解型HiBiT NanoDLR™检测方法检测Fluc(蓝色)和HiBiT(红色)信号。MZ1和dBET1选择性地将BRD4连接至两种不同的E3连接酶复合物以进行靶向降解,而星形孢菌素会引起一般毒性,导致HiBiT-BRD4和萤火虫萤光素酶(Fluc)均丢失。
可量化的动态范围跨越七个数量级

无论表达水平如何,宽的线性动态范围都能准确定量标签蛋白,以测量蛋白质丰度的变化。HiBiT NanoDLR™ 检测方法甚至能定量内源表达水平的低丰度蛋白。

产品订购信息
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产品 |
规格 |
目录号 |
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10ml |
NE2010 |
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100ml |
NE2020 |
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