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CytoTox 96®Non-Radioactive Cytotoxicity Assay(G1780)细胞介导的细胞毒性实验靶细胞数目优化方法
相关产品目录号:G1780
产品分类:细胞健康检测技术
问题类型:技术/操作答疑
产品关键词:细胞杀伤 比色法
靶细胞数目的优化:
在进行相关检测前,推荐您对测定的靶细胞进行数目的优化。
您可以按照说明书中所述方法进行靶细胞数目的优化:
采用0,5000,10000,20000/100µl浓度的靶细胞进行铺板。加入裂解液后离心,将50µl上清转移到检测孔板中,加入检测试剂后孵育30min终止反应,然后进行490nm吸收光检测。
按照上述检测方法,您会得到一条横轴是细胞数目和纵轴是吸光度的直线。如果细胞数目过多,这条线可能会到平台期,细胞数目(释放的LDH)不会与吸光度线性相关;
如果过少,会接近背景值,实验的变化窗口会非常窄,不利于之后的研究。比较理想的细胞数目既可以有较好的信噪比,又不会超出线性相关的范围(考虑到效应细胞自发释放也会贡献一部分LDH,靶细胞最大释放的信噪比也并不是越大越好)。
不同浓度的靶细胞数目测定,●=K-562,■=CEM, ▲=HSB-2,因为三种细胞系中LDH表达量的差异,需要采用不同的靶细胞数目进行LDH的测定。