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利用萤光素酶报告基因技术研究细胞信号通路的原理是什么？如需自行构建信号通路载体，推荐使用哪些质粒作为空载体？
相关产品目录号：E8411,E8421,E8431,E8441,E8451,E8461,N1031,N1041,N1051
产品分类：萤光素酶报告基因技术及应用
问题类型：产品选择指导
产品关键词：信号通路 表达调控
利用萤光素酶报告基因技术研究细胞当中的某条信号通路，需要将该信号通路对应的转录因子的应答元件（Response Element）克隆到萤光素酶报告基因载体上，通常要在报告基因的上游（5-UTR区）插入同一应答元件的多个串联重复。构建好的信号通路研究载体转染入细胞，当细胞受到刺激激活相应的信号通路时，萤光素酶的表达就会上调，以此来验证某种刺激或化合物是否可以引起该信号通路的激活。
Promega 提供一系列可用于细胞信号通路研究的空载体，列表如下（目录号，载体名称）：
- E8411, pGL4.23luc2/minP Vector
- E8421, pGL4.24luc2P/minP Vector
- E8431, pGL4.25luc2CP/minP Vector
- E8441, pGL4.26luc2/minP/Hygro Vector
- E8451, pGL4.27luc2P/minP/Hygro Vector
- E8461, pGL4.28luc2CP/minP/Hygro Vector
- N1031, pNL3.1Nluc/minP Vector
- N1041, pNL3.2NlucP/minP Vector
- N1051, pNL3.3secNluc/minP Vector
这些载体的共同特点是在萤光素酶报告基因的上游带有最小启动子（minimal promoter, minP），即启动子基本的TATA box元件，这些空载体转染入细胞会有较低水平的背景表达，但由于其启动子区域不含其它转录因子结合位点，因此研究者构建好的信号通路研究载体可以特异性的表征某条信号通路是否被活化。
以上载体中，pGL4系列采用luc2，即萤火虫萤光素酶为报告基因，pNL系列采用Nluc，即NanoLuc®萤光素酶为报告基因。Luc2P、luc2CP和NlucP代表萤光素酶基因上带有hPEST，或带有hCL1和hPEST两种促蛋白降解序列，我们称之为“快速应答基因”（ RapidResponse™ genes ）。快速应答基因在细胞中更容易被降解，蛋白存在的半衰期更短，当受到刺激时，会比普通的萤光素酶基因对刺激作出更快速、更明显的应答，因此，带有快速应答基因的载体更适合细胞信号通路研究。
名称中含有Hygro的载体代表质粒上带有潮霉素（Hygromycin）抗性基因，可以作为真核细胞稳定转染的筛选标记。pNL3.3secNluc/minP为分泌型NanoLuc®萤光素酶载体。
Promega 提供的用于信号通路研究的萤火虫萤光素酶预构建载体大多数是以pGL4.27luc2P/minP/Hygro为空载体构建的。
