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如何选择海肾内参载体?

相关产品目录号:E2231,E6921

产品分类:萤光素酶报告基因技术及应用

问题类型:产品选择指导

产品关键词:报告基因,载体选择

    通常选择带有组成型表达启动子的海肾萤光素酶表达载体来作为内参,主要包括pRL系列和pGL4系列中的部分载体。


    理论上,内参载体和主报告载体并非一一对应,例如pGL3系列载体,既可以选择用pRL系统载体作为内参,也可以选择pGL4系列海肾萤光素酶表达载体作为内参。不过,不同时期的载体产品表达效率可能会相差较大,使用同一代产品,两者的表达效率相近,更容易调整两种载体共转染比例,可能是大部分使用者更常见的选择方案。同一代的不同海肾内参载体之间,最主要的区别是携带的启动子不同,包括CMV、SV40、TK等。通常,内参基因表达的活性应当显著的高于背景组,同时,尽量小,确保不干扰主报告基因的表达。所以,我们建议选择内参载体时,首先考虑活性较弱的TK启动子驱动的载体(例如pRL-TK,pGL4.74)。当通过文献资料或者预实验,发现该载体在目标细胞模型中表达效率过低,或者会受到实验研究因素干扰时,再考虑其他表达活性更强的载体(例如pRL-SV40或pGL4.75),或自己构建所需的特殊启动子载体。

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