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常见问题

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使用ADP-Glo™ Kinase Assay进行激酶抑制剂筛选时,为什么要先做激酶的滴定曲线(Kinase titration curve)?

相关产品目录号:V6930,V9101,V9102,V9103,V9104

产品分类:小分子药物研发技术

问题类型:技术/操作答疑

产品关键词:激酶活性检测,激酶抑制剂药物研发,生化检测

在进行激酶抑制剂筛选之前,我们建议您绘制激酶的滴定曲线以确定合适的激酶用量,这是优化激酶反应体系的重要一步。

  • 激酶的滴定是用1 x 激酶反应buffer将激酶倍比稀释,与固定浓度的底物(最适用量通过底物滴定曲线获得,或参考文献)和ATP混合进行激酶反应并用ADP-Glo™ Kinase Assay检测。不同激酶用量得到的发光信号强度除以不加激酶的对照组的信号强度,即得到不同激酶用量时的检测信噪比(Signal : Background Ratio)。
  • 由于ADP-Glo™ Kinase Assay灵敏度非常高,少量ADP的生成即可得到较高的信噪比,因此可以在抑制剂筛选时使用更少的激酶用量。最佳的激酶用量是,该用量既在激酶滴定曲线的线性范围之内,又可以得到合适的检测信噪比。
  • Promega提供的激酶系统(Kinase Enzyme Systems),在Application Note中已提供了激酶滴定曲线的数据用于参考。

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