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ADP-Glo™ Kinase Assay 和 ADP-Glo™ Max Assay该怎么选?
相关产品目录号:V6930,V9101,V7001
产品分类:小分子药物研发技术
问题类型:产品选择指导
产品关键词:激酶活性检测,激酶抑制剂药物研发,生化检测
ADP-Glo™Kinase Assay与ADP-Glo™ Max Assay的基本原理一致,都是基于生物发光法的 ADP 检测试剂盒,通过定量酶反应中产生的ADP,为检测 ATP 酶或激酶活性提供一种通用、均质、高通量的筛选方法。这两种方法都可以用于检测几乎所有可生成 ADP 的酶的活性 ( 如激酶或ATP 酶), 产生与酶活性正相关的强信号,具有宽广的动态范围,即使在 ATP 到 ADP 的转化率很低时,也能产生强信号,适用于低活性或少量的酶的检测,适用于各种多孔板模式。检测都是分两步进行:
1) 在ADP 生成反应(例如激酶反应)完成后,加入等体积的 ADP-Glo™ 试剂终止反应,并消耗尽剩余的ATP;
2) 加入各自的检测试剂, 将新生成的ADP 转变为ATP,同时在偶联的萤光素酶/ 萤光素反应中将 ATP 转变为光信号。
ADP-Glo™ Max Assay是在ADP-Glo™ Kinase Assay基础上,针对需要更高浓度ATP的酶反应(例如Pgp ATPase,Na+/K+ ATPase等)进行了优化,可以检测包含高达5mM的ATP的反应。但是在低于500µM ATP的检测中,它的检测灵敏度会略逊于ADP-Glo™ Kinase Assay(低浓度ATP时信背比会低)。所以,为了达到最好的检测效果,我们建议ATP用量在500µM到5mM的检测中,使用ADP-Glo™ Max Assay;
当ATP用量低于1mM,通常是1µM到1mM,检测时建议使用ADP-Glo™ Kinase Assay。使用时应遵循各自对应的说明书,其中的操作细节和注意事项会略有差异。(例如,在ATP消除步骤,ADP-Glo™ Kinase Assay要求加入检测试剂后,激酶反应体系中应有至少0.5mM MgCl2,而ADP-Glo™ Max Assay要求至少5mM MgCl2)。