快速反应程序来源于实验经验，合成得到的cDNA仅适用于Real Time PCR定量。如果需要进行基因克隆等其他实验或进行Real Time PCR实验后目的基因的Ct值大于30，建议采用GoScript
TM反转录系统的标准反应程序或参考完整操作手册优化条件以最大限度提高反转录效率，提高检测灵敏度。
快速反应程序（一般的RNA模板，快速反应条件仅适合于下游做qPCR）：
1. 将GoScriptTM反转录系统中各组分取出置于冰上融化后，按下表加入各组分，配制RT-Mix（按总反应体积20μl计算；通常配制RT-Mix要比实际样品数多1-2个，以防止液体挂壁造成的体积损失）：
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组分
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每反应加入量
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Nuclease-Free Water
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0.6μl
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GoScript™ 5X Reaction Buffer
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4μl
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MgCl2(25mM)
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4μl
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Oligo(dT)15Primer (500μg/ml)
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0.5μl
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Random Primers (500μg/ml)
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0.5μl
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PCR Nucleotide Mix
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1μl
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Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor
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0.4μl
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GoScript™ Reverse Transcriptase
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1μl
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总体积
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12μl
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2. 将配好的RT-Mix分至各反应管，加入总RNA（1-2μg）， 并加水将体积补齐至20μl：
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组分
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每反应加入量
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RT-Mix
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12μl
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RNA(1-2μg)
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__μl
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Nuclease-Free Water
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__μl
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总体积
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20μl
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标准反应程序（mRNA长度较长或GC含量较高，>60%时）：
1. 取一定量模板RNA加入引物：
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组分
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每反应加入量
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RNA (最高5µg/reaction)
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__μl
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Oligo(dT)15Primer (0.5µg/reaction)
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1μl
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Random Primers (0.5µg/reaction)
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1μl
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Nuclease-Free Water (加至10μl)
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__μl
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总体积
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10μl
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2. 将模板RNA与引物的混合物进行70℃、5 min预变性，完成后取出置于冰上：
3. 设置以下程序进行反转录反应，包括42℃、15min的延伸和70℃、15min的反转录酶灭活：
4. 配制RT-Mix，每管加入10μl模板RNA与引物的混合物：
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组分
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每反应加入量
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Nuclease-Free Water
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1.6μl
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GoScript™ 5X Reaction Buffer
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4μl
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MgCl2(25mM)
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2μl
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PCR Nucleotide Mix
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1μl
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Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor
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0.4μl
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GoScript™ Reverse Transcriptase
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1μl
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总体积
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10μl
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5. 设置反转录程序，包括退火、延伸、逆转录酶失活三步。 程序完成后得到cDNA。
