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无细胞表达系统的产物如何检测？
相关产品目录号：L5001,L5061,L5070,L5080,L1110,L3260,L1170,L1101
产品分类：无细胞蛋白表达技术
问题类型：技术/操作答疑
产品关键词：无细胞表达，蛋白表达检测
无细胞表达系统的蛋白产量与在培养的大肠杆菌中的蛋白表达产量相比要低很多，不是所有系统的产物都可以通过SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色检测到，我们建议您用灵敏度更高的Western Blot或各种标记方法检测（建议电泳上样量：1-2ul无细胞蛋白表达产物）：
1.如有蛋白特异性抗体，或者蛋白带标签，可用标签抗体，进行Western Blot检测。
2.如无合适的抗体，可以在合成蛋白的同时给蛋白带上标记，通过标记检测，例如在合成体系中加入带硫35标记的甲硫氨酸，可以通过放射自显影检测。Promega提供以下两种不同的非放射性标记方式，分别是荧光标记和生物素标记，其检测方法可达到与放射自显影同等的灵敏度：
1.如有蛋白特异性抗体，或者蛋白带标签，可用标签抗体，进行Western Blot检测。
2.如无合适的抗体，可以在合成蛋白的同时给蛋白带上标记，通过标记检测，例如在合成体系中加入带硫35标记的甲硫氨酸，可以通过放射自显影检测。Promega提供以下两种不同的非放射性标记方式，分别是荧光标记和生物素标记，其检测方法可达到与放射自显影同等的灵敏度：
- FluoroTect™ GreenLys in vitro Translation Labeling System (L5001)：带绿色荧光标记的赖氨酸tRNA，加入无细胞表达体系中反应，新合成的蛋白上即带有绿色荧光标记，可在SDS-PAGE后，直接通过荧光凝胶成像检测。
- Transcend™ tRNA (L5061)：带生物素标记的赖氨酸tRNA，加入无细胞表达体系中反应，新合成的蛋白上即带有生物素标记，可用Transcend™ Non-Radioactive Translation Detection Systems (L5070/L5080)，通过显色法或化学发光法进行检测。
