RNasin® Ribonuclease Inhibitors

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RNAase 是广泛存在的,可引起 RNA 降解,破坏 RNA 完整性。天然型和重组型的 RNase 抑制剂是 50kDa 大小的蛋白,通过非共价结合 RNase 以 1 : 1 的比例抑制 RNase A 家族和人胎盘 RNase。对于下游应用,如 GoScript 逆转录酶、 AMV/M-MLV 逆转录酶、SP6、 T7/T3 RNA 聚合酶和 Taq DNA 聚合酶,重组 RNasin 抑制剂不抑制 RNase T1、S1 核酸酶、曲霉 RNase、RNase H、RNase ONE 核糖核酸酶和下游应用的酶。RNasin® Plus RNase Inhibitor (RNasin® RNA 酶抑制剂 ) 是一种作为可溶性蛋白在 E. coli 中表达的重组哺乳动物 RNase 抑制剂,可以利用离子交换和疏水层析相结合的方法纯化获得。该蛋白能够抑制真核 RNase( 如 RNase A 和 RNase B) 活性,与人胎盘 RNase 抑制剂相似。

RNasin® Plus RNase Inhibitor 经过 RT-PCR 检验,能与 AMV、M-MLV 和 ImProm-II™ Reverse Transcriptases 或 Taq 及 Tfl DNA Polymerases 兼容。 RNasin® Plus RNase Inhibitor 在 TaqMan® 检测中发现也能和定量、实时 RT-PCR 兼容。与人源的这种蛋白相比,该抑制剂具有更高的抗氧化活性。研究表明来源于人的该蛋白的两个半胱氨酸对氧化非常敏感,并形成二硫键封闭了抑制剂的活性位点。由于天然氨基酸的多样性,RNasin® Plus RNase Inhibitor 不能形成封闭位点的二硫键。此外,还发现这种重组蛋白具有以前从未认识的特性,即在 50℃以上能持续抑制 RNase。将 RNasin® Plus RNase Inhibitor 和 RNase 的溶液加热再冷却,不会造成 RNase 活性的恢复——即使溶液温度超过 RNasin® Plus 蛋白的变性温度。因此,RNasin® Plus RNase Inhibitor 能够在加热前、加热中及加热后保护 RNA,即使在 RT-PCR 中第一链 DNA 合成温度下亦如此。将溶液置于 70℃,15 分钟,没有观察到 RNase 的活性恢复。

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