NanoBRET™ Target Engagement Assay Components

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NanoBRET™ Target Engagement (TE) Intracellular Assay 是测量完整细胞内化合物与靶蛋白结合的试验。该试验基于NanoBRET™ System 而建立。NanoBRET™ System 是一种用来测量活细胞内邻近分子间相互作用的能量转移技术。 NanoBRET™ TE Assay 通过化合物竞争性地取代与靶蛋白-NanoLuc® 融合蛋白可逆结合的NanoBRET™ Tracer( 示踪剂 ) 的方法来分析待测化合物的表观亲和力。 NanoBRET™ TE Assay 使用4个关键组分:与NanoLuc® 萤光素酶融和表达的细胞靶蛋白;与靶蛋白特异结合的可穿透细胞膜的荧光示踪剂;NanoLuc® 萤光素酶底物;不能透过细胞膜的 NanoLuc® 萤光素酶的抑制剂。BRET的实现过程是发光能量从NanoLuc® 萤光素酶转移到与靶蛋白-NanoLuc® 融合蛋白结合的荧光示踪剂上。作用于细胞并与细胞内靶蛋白-NanoLuc® 融合蛋白特异结合的化合物会导致BRET 的减弱。为确保对细胞内的靶向结合进行精确评估,需要使NanoLuc® 萤光素酶抑制剂减少操作过程中产生的破损细胞引起的任何细胞外的NanoLuc® 信号,同时不影响健康活细胞内表达的NanoLuc® 萤光素酶。


Promega公司拥有NanoLuc®萤光素酶(又称NanoLuc®荧光素酶)及底物相关专利。

NanoLuc®萤光素酶专利如下:

专利号:ZL 2010 8 0019477.4;专利公告号:102459579

NanoLuc®萤光素酶底物(Furimazine)的专利如下:

专利号:ZL 2011 8 0063659.6;专利公告号:103443121

专利号:ZL 2011 8 0062485.1;专利公告号:103370319

注意:使用NanoLuc®产品,研究人员需同意接受本有限使用商标许可条款(LULL)的约束,否则视为侵犯专利权。


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