Glucose Uptake-Glo™ Assay
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Glucose Uptake-Glo™ Assay 是一种非放射性的、基于培养板的、均相生物发光检测系统，用于检测哺乳动物细胞的葡萄糖摄取。试剂盒原理是基于对2- 脱氧葡萄糖-6- 磷酸(2DG6P) 的检测。向细胞加入2- 脱氧葡萄糖(2DG) 后，2DG 被转运进入细胞并迅速发生磷酸化( 磷酸化方式同葡萄糖) 生成2DG6P。但是，那些能够进一步修饰葡萄糖-6- 磷酸(G6P) 的酶却无法修饰2DG6P，因此这种不能穿过细胞膜的被检测物便在细胞内聚集。 经过简短的孵育，加入酸性去污剂(Stop Buffer) 裂解细胞、终止摄取并破坏细胞内的NADPH，再加入高PH 值的缓冲溶液(Neutralization Buffer) 中和酸性溶液。之后，将含有葡萄糖-6- 磷酸脱氢酶(G6PDH)、NADP+、Reductase( 还原酶)、Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase 和proluciferin 底物的Detection Reagent 加入样品孔。G6PDH 氧化2DG6P 生成6- 磷酸脱氧葡萄糖内酯(6PDG)，同时将NADP+ 还原为NADPH。Reductas 利用NADPH 将proluciferin 转化为luciferin，luciferin 随即被Ultra-Glo™Recombinant Luciferase 利用产生发光信号，发光信号与2DG6P 的浓度成正比。
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