cAMP-Glo™ Max Assay

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cAMP-Glo Max Assay (cAMP-Glo Max 检测试剂盒) 是一种均质的、利用生物发光原理检测细胞内环腺苷酸(cAMP) 水平的高通量方法。若某种化合物能调节与腺苷酸环化酶偶联的G 蛋白偶联受体(GPCR),则会明显地改变细胞内的cAMP 水平。cAMP-Glo™ Max Assay 用于监测细胞内的cAMP 水平在以下应答反应中的改变:激动剂、拮抗剂、及受试化合物对GPCR 的效应。这种检测方法的原理是:cAMP 激活蛋白激酶A(PKA) 全酶的活性,降低ATP 含量,从而引起ATP 偶联的萤光素酶反应的光信号降低。cAMP-Glo Max Assay 将裂解缓冲液与cAMP 反应缓冲液合二为一,成为cAMP-Glo ONE Buffer (cAMP-Glo ONE 缓冲液)。这种新的规格简化了实验操作过程,减少了完成检测所需的时间。新的ONE Buffer 以5 倍浓度提供,为细胞培养液的起始体积提供更多的灵活性。

cAMP-Glo Max Assay 可在96 孔、384 孔和1536 孔板中进行检测。用一种测试化合物对细胞进行适当时间的诱导,可以调节cAMP 水平。诱导后,裂解细胞,释放的cAMP 激活试剂中的蛋白激酶A。然后加入Kinase-Glo® Reagent 终止PKA 反应,并用萤光素酶反应检测剩余ATP。培养板放置于微孔板发光检测仪中读取数据。发光信号的半衰期超过4 个小时,使得研究人员有足够的时间来读数,实验用的发光检测仪也不需要带有进样器。
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