GloSensor™ cAMP Assay
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GloSensor™ cAMP Assay 采用了一种全新的方法来检测活细胞内 cAMP 的水平。 cAMP 是参与 GPCR 信号转导的一种重要的二级信使，通过 Gα-s 和 Gα-i 蛋白产生作用。这个新的试剂盒基于 GloSensor™ 技术，该技术将萤火虫萤光素酶经过遗传改造，插入了一个结合 cAMP 的蛋白组分。当结合上 cAMP 后，萤光素酶构象发生改变，导致光输出的增加。这种活细胞检测在利用 cAMP 进行信号转导动力学和调控等研究方面表现出众。 将目的受体和该生物传感器在选定的细胞系中进行瞬时表达时，研究者可使用 GloSensor™ cAMP 检测试剂盒进行检测。此外，还可以创造出同时被生物传感器和目的受体基因转染的稳定细胞系。操作过程很简单：用 GloSensor™ cAMP Reagent (GloSensor™ cAMP 试剂 ) 预平衡细胞大约 2 小时；然后用特定的激动剂 / 拮抗剂或者未知活性的化合物处理细胞， 10-30 分钟后检测发光。无需其它加样步骤或者操作过程。几乎任何带有自动进样器的发光检测仪都能进行有效检测，比如 GloMax® 系列发光检测仪。 GloSensor™ cAMP 试剂要求在 GloSensor™ Limited Use Label License (GloSensor™ 有限使用标签许可证书 ) 指导下使用。
选择合适的质粒： 我们提供了生物传感器的两种变体。在多数实验中，我们建议首选 pGloSensor™-22F cAMP 质粒。 pGloSensor™-22F cAMP 质粒： 与 pGloSensor™-20F cAMP 质粒相比，用该质粒进行体外无细胞表达得到的生物传感器，在 cAMP 饱和时活化 EC50 及信噪比得到增强。而在活细胞中，这两种质粒表现出的性能基本类似。 pGloSensor™-20F cAMP 质粒： 该质粒编码的生物传感器可在37℃下的 HEK293 细胞中表现出良好的性能；而 pGloSensor™-22F cAMP 质粒所发出的萤光在生理温度下更难检测。 关于这两种质粒基本性能差异的更深入解释，请参阅 Technical Manual (#™076) 的第 3.B 节——GloSensor™质粒的选择建议。
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