更明亮的配体，免洗操作方案

Janelia Fluor^® HaloTag^® Ligands，包括JFX染料系列，专为在内源性环境下表征HaloTag^®融合蛋白而设计。这些Janelia Fluor^® HaloTag^®染料涵盖了整个可见光谱范围，凭借其独特的荧光生成特性与多用途性能及细胞通透性，使其成为标记细胞内蛋白质的理想选择。

JFX染料（Janelia Fluor^®染料的类似物）在罗丹明类化合物的烷基氨基取代基中引入氘原子，从而抑制了光化学诱导的光谱漂移，并降低了不可逆的光漂白现象。Janelia Fluor^®和JFX染料因其卓越的光稳定性，使其在活细胞中进行检测及单分子成像研究时具有无可估量的价值。

这些染料已应用于多种成像方法，包括针对固定细胞样本、活细胞以及体内样品的重要实验技术：

• 超分辨率和高分辨率成像
• 标准共聚焦成像
• 流式细胞分选（FACS）
• 荧光成像仪下的凝胶内检测

Janelia Fluor^®和JFX染料的一个显著特点是支持通过脉冲-追踪标记法进行不同颜色配体的顺序标记，这一特性有助于实时监测蛋白质动态变化，如转运和周转过程。

HaloTag^®可交换标记技术

冻干粉形式的Janelia Fluor^® HaloTag^® Ligands

我们提供新型、无DMSO、冻干粉形式的Janelia Fluor^® HaloTag^® Ligands，旨在优化您的实验流程并最大程度减少浪费。冻干形式具有以下优势：

•        简化的实验流程：配体可以直接在水性溶液中重新溶解（包括细胞培养基）。

•        去除有机溶剂：不再需要可能干扰实验的有机溶剂。

•        精确定量：每个小瓶内均含有恒定数量的冻干粉配体。

•        透明包装设计：透明的小瓶使得配体清晰可见，有助于您准确、自信地进行准备工作。

•        单独分装：高效进行多个实验，减少浪费与资源消耗。

使用Janelia Fluor^® HaloTag^® Ligands进行活细胞标记

在本实验中，亲代U2OS细胞和稳定表达带有三个核定位序列的HaloTag^®蛋白融合体的U2OS细胞均贴壁培养在玻璃底室温载玻片上。然后将这些细胞在37°C + CO₂的细胞培养箱内，用Janelia Fluor^® 503、Janelia Fluor^® JFX 554或Janelia Fluor^® 635 HaloTag^®配体分别标记30分钟。随后，将细胞培养基替换为不含酚红的培养基。利用以下激光激发波长对细胞进行成像：针对Janelia Fluor^® 503 HaloTag^®配体，采用488nm激光激发（图A）；对于Janelia Fluor^® JFX 554 HaloTag^®配体，使用561nm激光激发（图B）；而对于Janelia Fluor^® 635 HaloTag^®配体，则应用637nm激光激发（图C）。

结果显示，在表达HaloTag的细胞中，荧光标记仅限于细胞核内；而未表达HaloTag的亲代细胞则无任何标记现象。所有图像均通过配备有40X油镜的尼康AX/AXR共聚焦显微镜收集得到。

流式细胞术分析Janelia Fluor^® HaloTag^®配体标记的蛋白质

使用CRISPR/Cas9技术对HEK293细胞进行了基因编辑，在内源性BRD4蛋白的N端标记HaloTag。编辑后的细胞池用Janelia Fluor^® 646 HaloTag^®配体进行标记，并利用BD FACSMelody™流式细胞分选仪进行单克隆分离。在细胞群体扩增之后，使用Janelia Fluor^® 646 HaloTag^®配体标记表达HaloTag的克隆细胞以及亲代HEK293细胞，都在BD LSRFortessa™流式细胞仪上进行了流式细胞术分析。结果显示，那些表达内源性BRD4蛋白与HaloTag蛋白融合体的克隆细胞群（蓝色直方图）相较于被同样标记了Janelia Fluor^® 646 HaloTag^®配体的亲代HEK293细胞（粉色直方图），其平均荧光强度显示出五倍左右的显著偏移（增强了五倍）。