NanoBRET™ Target Engagement K192 Kinase Selectivity System
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分析活细胞中不同激酶组合的选择性
- 分析化合物对一组192种人激酶的细胞选择性；
- 优化后的"仅需添加"的细胞水平检测的方案，可以在单次实验定量192种全长激酶的化合物占有率；
- K192系统提供可直接转染的激酶载体组试板和简单的NanoBRET™ TE Kinase Assay。
分析活细胞对192种激酶的化合物的选择性
NanoBRET™ Target Engagement (TE) K192 Kinase Selectivity System 可以在单个实验中定量检测细胞内化合物对192种激酶的占有率。该系统依赖NanoBRET™ TE 技术，这是一种生物发光共振能量转移 （BRET） 方法，使用小而极亮的 NanoLuc® 萤光素酶作为能量供体，使用可渗透细胞的 NanoBRET™™ TE tracer作为能量受体。K192 Kinase Selectivity System是一种活细胞检测方法，使用”仅需添加“的多孔板形式和单个NanoBRET™ TE 激酶检测试剂盒。NanoBRET™ TE K192激酶选择性系统针对每种激酶进行了优化，以提供定量占有率数据，从而能够对化合物激酶相互作用进行细胞学分析。
NanoBRET™靶向结合检测原理
NanoBRET™ Target Engagement (TE) K192 Kinase Selectivity System 采用NanoBRET™ TE技术，这是一种生物发光共振能量转移（BRET）方法。在这种方法中，靶标蛋白在哺乳动物细胞中表达靶标-NanoLuc®融合蛋白。BRET是通过从NanoLuc®萤光素酶到细胞渗透性NanoBRET™ TE Tracer的发光能量转移来实现的，该NanoBRET™ TE Tracer与靶标-NanoLuc®融合蛋白结合。Tracer具有细胞渗透性，测试化合物的结合可导致完整细胞内的NanoLuc®靶向融合蛋白和细胞渗透性荧光Tracer之间的NanoBRET™信号丢失。使用为每个靶标提供的优化检测条件，该检测可产生定量的细胞内化合物亲和力和占有率。使用允许对BRET信号进行归一化的控制来量化复合占用率。
K192激酶选择性系统提供交钥匙细胞分析
NanoBRET™ Target Engagement (TE) K192 Kinase Selectivity System包含一个 NanoBRET™ TE K192 Kinase Vector Panel和一个 NanoBRET™ TE Intracellular Kinase Assay (K-10)。优化的方案提供了使用多孔板的“仅需添加”工作流程。首先，只需将载体检测组合转染到多孔板中的 HEK293 细胞或 TransfectNow™ HEK293 细胞中。孵育过夜后，将测试化合物添加到检测板中，并根据提供的优化方案进行 NanoBRET™ TE Intracellular Kinase Assay (K-10)。多功能酶标仪用于测量BRET信号。
代表激酶组的 192 种激酶的多样化组合
NanoBRET™ Target Engagement (TE) K192 Kinase Selectivity System中的192个激酶在树状图中表示为绿点，表明该系统广泛覆盖激酶组。
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