NanoBRET™ TE Intracellular RAF Dimer Assays
购买产品
-
检测二聚体形式的RAF激酶的细胞内化合物亲和力和占有率
检测全长ARAF、BRAF和CRAF在活细胞中的化合物亲和力和占有率
评估RAF同源二聚体（BRAF和CRAF）或RAF异源二聚体（ARAF、BRAF和CRAF）中RAF单体的靶标结合情况
方便即用的检测方法，采用简单的 “添加-读取”的工作流程
可进行10,000次检测的示踪剂K-4（N2540）和K-10（N2840）检测试剂盒可分别与RAF二聚体检测试剂盒BC和RAF二聚体检测试剂盒A配合使用
在活细胞中检测化合物对RAF二聚体的亲和力和占有率
RAF激酶（ARAF，BRAF和CRAF）在MAPK信号通路中起重要作用，该通路是癌症中最易发生突变的通路之一。这种信号通常通过RAF二聚体的形成来介导，因此这些二聚体成为药物发现的重要目标。NanoBRET™ TE Intracellular RAF Dimer Assays可以用来检测化合物在活细胞中对RAF激酶的亲和力和部分占有率。该测定依赖于NanoBRET™ TE技术，这是一种生物发光共振能量转移（BRET）方法，使用萤光素酶作为能量供体和细胞通透性的NanoBRET™TE tracer作为能量受体。与采用融合了 NanoLuc® 萤光素酶的靶蛋白作为
BRET 供体不同，NanoBRET™ TE Intracellular
RAF Dimer Assays采用了 NanoLuc® 二元技术（NanoLuc® Binary Technology，NanoBiT），从而能够在
RAF 二聚体上实现细胞内靶标结合度的测定。
NanoBRET™ TE RAF二聚体检测工作原理
NanoBRET™ TE Intracellular RAF Dimer Assays采用NanoLuc® Binary
Technology（NanoBiT），这是一种由大萤光素酶亚基（LgBiT）和小互补肽（SmBiT(q)）组成的结构互补系统，用于评估RAF激酶在二聚体复合物中的靶点相互作用。具体来说，在细胞中，LgBiT-全长RAF的融合蛋白与SmBiT(q)-全长RAF的融合蛋白共同表达。这些 RAF 蛋白与组成性激活突变体 KRAS(G12C) 共表达。当在 KRAS(G12C) 存在下 RAF 蛋白相互作用并形成二聚体时，LgBiT和SmBiT(q)亚基聚集在一起形成作为BRET供体的活性萤光素酶。能量受体是一种细胞通透性荧光NanoBRET™ tracer，可特异结合复合物中的一个或两个RAF单体。与RAF单体（或多聚体）结合的化合物的加入会与tracer发生竞争，导致BRET信号剂量依赖性下降。
在NanoBRET™ TE Intracellular RAF Dimer Assays中的NanoBiT®系统使用独特的SmBiT(q)肽，使NanoBiT®萤光素酶对Extracellular NanoLuc® Inhibitor敏感。这种抑制剂抑制了来自受损细胞和细胞碎片的信号，确保NanoBRET™信号来源于活细胞。
评估RAF同源二聚体和RAF单体在RAF异二聚体中的靶点相互作用
将适当的RAF融合表达载体与推荐的检测方法相匹配，可以检测化合物与BRAF和CRAF同源二聚体或ARAF、BRAF和CRAF单体在RAF异二聚体复合物中的结合。要评估RAF同源二聚体，将LgBiT和SmBiT(q)融合表达载体转染至细胞，这些载体表达相同的您感兴趣RAF蛋白（图A-B和表）。要评估RAF二聚体中的特定RAF单体，将您感兴趣的RAF单体与第二种突变型RAF蛋白配对（图C-E和表）。这些突变型RAF蛋白含有一种丙氨酸-苯丙氨酸突变，可以防止tracer与第二种RAF单体结合，但仍然能够与感兴趣的RAF单体形成二聚体。
在所有靶点结合检测中，使用KRAS(G12C)表达载体以驱动RAF二聚体的形成。
跨RAF二聚体变体的化合物活性概览
化合物在多种RAF构型中的活性。NanoBRET™ TE Intracellular
RAF Dimer Assays可以使用相似的工作流程来评估测试化合物在多种 RAF 构象下的活性。这里展示了RAF二聚体抑制剂TAK-632（图A）和LXH254（图B）的活性谱示例。这两种抑制剂都可以与所有RAF二聚体结合，但两种化合物对CRAF同源二聚体和ARAF单体的亲和力较弱。
| 产品名称 | 规格 | 目录号 | 目录价 | 促销价 | 备注 |
