TruTiter™ Reagent System

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通过评估AAV衣壳完整性,实现基于dPCR或qPCR的病毒基因组定量的一致性


  • 一致性的AAV基因组定量
  • 无需DNase处理
  • 简单快速的工作流程
  • 膜不透性,保持病毒完整性

TruTiter™ Reagent:值得信赖的AAV定量工具


腺相关病毒(AAV)是基因治疗递送中常用的载体。AAV基因治疗的主要挑战之一是开发有效的质量控制和质保方案,因为准确量化和表征AAV生产批次对于临床剂量的精准把控至关重要。目前的方案,如DNase处理和哺乳动物感染性测定,通常不够完善,可能导致批次间的高度变异性,从而因功能基因剂量的不准确测定而导致试验结果不理想。  


在qPCR或dPCR之前,污染性DNA可能会干扰AAV基因组滴度的准确测定。通过DNase处理清除污染DNA的操作通常繁琐,且因酶切不完全而难以实现病毒滴度的精确测定。  


TruTiter™ Reagent System无需DNase处理步骤即可实现AAV病毒基因组的一致定量。




TruTiter™ 技术原理


  • TruTiter™ Reagent System采用一种新型分子,该分子具有膜不透性,能够与任何暴露的核酸结合,从而阻止下游扩增反应,省去了AAV基因组滴度测定流程中DNase处理步骤。  
  • TruTiter™ Reagent与现有的PCR病毒定量方案兼容,可直接使用多种qPCR或数字PCR平台进行扩增。


使用TruTiter™Reagent,只有完整衣壳内的DNA能够被扩增,从而实现基因组滴度的精准测定。


TruTiter™Reagent System简单快速的检测流程





检测性能数据


与基于DNase的dPCR流程相比,TruTiter™Reagent显著降低变异性。


1. TruTiter®Reagent vs. DNase
AAV2-NanoLuc® 病毒衣壳(1010 GU/ml)在65°C下处理10分钟。热处理后,AAV颗粒分别用DNase(红色)或TruTiter™Reagent(绿色)处理,并使用dPCR进行扩增,每种处理各进行8次技术重复。
AAV2-NanoLuc® 病毒衣壳(1010GU/ml)用0.1% Tween®-20 处理10分钟。去污剂处理后,AAV颗粒分别用DNase(红色)或TruTiter™Reagent(绿色)处理,并使用dPCR进行扩增,每种处理各进行8次技术重复。


2. TruTiter®Reagent vs.DNase vs.Mammalian Infectivity Assays


AAV2-NanoLuc® 病毒颗粒(107 GU/ml)在指定温度下处理10分钟。温度处理后,AAV颗粒分别用DNase(红色)或TruTiter™ Reagent(绿色)处理,随后进行dPCR检测。同时,使用HEK293细胞进行了24小时感染性测定(蓝色)。为便于解读,数据以相比室温(R.T.)处理所获得信号的百分比表示。


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