Q:DeadEnd™两种试剂盒的特点和区别
Promega提供两种通过检测DNA断裂进行凋亡分析的试剂盒,DeadEnd™ Colorimetric TUNEL System, DeadEnd™ Fluorometric TUNEL System。
两者都是通过 TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 的原理,在末端脱氧核苷转移酶(TdT) 的作用下,依靠催化标记核苷酸掺入到DNA 的3' -OH末端来检测凋亡细胞,可以用于培养细胞或FFPE组织切片中检测。
两种试剂盒主要的区别在于核苷酸标记物不同,其中 DeadEnd™ Colorimetric TUNEL System使用的是生物素标记的核苷掺入断裂DNA的3' -OH末端,然后加入辣根过氧化酶标记的链霉亲和素(Streptavidin HRP)结合到上述生物素标记的核苷上,通过过氧化酶的底物、过氧化氢和稳定的显色剂氨基联苯胺(DAB)显色后显微镜进行检测。
DeadEnd™ Fluorometric TUNEL System使用TdT酶将FITC-12-dUTP掺入到凋亡细胞中断裂DNA的3‘-OH末端。FITC标记的DNA可以使用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。FITC为绿色荧光,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm。