研究者常常使用单萤光素酶报告基因系统来监测遗传调控元件的功能，因为其操作简单而且反应灵敏。但是，单报告基因系统无法区分不同实验组之间信号的变化是来自对报告基因的特异调控，还是细胞整体事件的结果（增殖、凋亡、坏死等），也无法区分不同组之间转染效率和细胞数目差异带来的影响。所以，在分析实验结果之前，一般会通过样品的其他特征先对数据进行校正，尽量减少上述非实验研究变量的干扰，这也就是数据的归一化处理。

       常用的归一化方法有：细胞总蛋白，细胞活力，细胞数，及内参报告基因等。对于稳定转染的单报告基因细胞系来说，细胞总蛋白、细胞活力（例如CellTiter-Glo^®或CellTiter-Fluor™ Viability Reagent）、细胞数这几个参考指标，可以很好的排除不同组之间由细胞整体事件和细胞数目带来的干扰。对于瞬时转染实验，这几个指标只能排除一部分干扰，转染效率可能引入的显著变异，却无法解决。这种情况下，建议共转染另外一个可以组成型表达的报告基因，来作为内对照，即内参报告基因（双报告基因系统）。内参报告基因的活性与转染的DNA量与细胞整体的蛋白表达能力相关。用内参基因的表达活性来校正待测基因的表达量，可以排除转染效率和细胞整体事件对结果的影响。

      Normalizing Genetic Reporter Assays: Approaches and Considerations For Increasing Consistency And Statistical Significance By Trista Schagat, Ph.D., Aileen Paguio, M.S., 

      And Kevin Kopish, B.S., Promega Corporation