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Q:pGL3系列包含哪些载体,分别用于哪些研究?

pGL3萤光素酶报告基因载体系列共有四个载体,包括:pGL3-Basic VectorpGL3-Promoter VectorpGL3-Enhancer VectorpGL3-Control Vector。各质粒图谱如下图:

pGL3系列载体主要用于哺乳动物细胞基因转录调控研究。这一系列载体可以用于多种转录调控相关因素的研究,如顺式作用元件(启动子、增强子等),或反式作用因子(转录因子等)。载体经过改造可以在哺乳动物细胞中高效表达萤火虫萤光素酶(luc+)。

pGL3-Basic Vector缺少真核启动子和增强子序列,在克隆感兴趣的调控序列方面具有最大的灵活性。转染后在细胞中表达的萤光素酶的活性取决于luc+上游是否有方向确且具有启动子功能的核酸序列。

pGL3-Enhancer Vector包含一个位于luc+poly(A) 信号下游的SV40增强子。这有助于一些功能较弱的启动子元件的验证,因为增强子的存在通常会导致更高水平的luc+转录,更容易检测到一些弱的转录活性。

pGL3-Promoter Vector包含一个位于萤光素酶基因上游的SV40启动子。 含有预测的增强子元件的DNA片段可以插入Promoter-luc+转录单元的上游或下游。其他一些验证的转录调控元件(SilencerResponse Element)也可以插入Promoter-luc+转录单元的上游进行验证。

pGL3-Control Vector同时包含SV40启动子和增强子序列,导致luc+在许多类型的哺乳动物细胞中都能够强烈表达。该质粒可用于监测转染效率,也可以作为其他pGL3重组质粒启动子或增强子活性的阳性对照。

 

 

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