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Q:反转录引物选择

Oligo(dT):多个T碱基连接而成的寡聚引物,适用于具有Poly(A)尾的RNA。因绝大多数真核生物mRNA具有3'端Poly(A)尾,此引物可与其配对,仅mRNA可被转录,具有较高的特异性。其对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

随机引物:多个任意的碱基连接而成的一套寡聚引物组,适合各种RNA的逆转录,包括mRNA,rRNA,tRNA均可以作为模板,尤其适合模板丰度很低的情况。当目标具有复杂二级结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,可使用随机引物。

特异性引物:与模板序列特异性互补的引物,适用于目的基因序列已知的情况。不推荐用于第一链cDNA的合成,可用于一步法RT-PCR。miRNA反转录需要特异性引物完成。

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