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Q:体外转录试剂盒操作有哪些注意事项？

1. 模板可以是PCR产物或线性化的质粒DNA，模板纯度会影响产量，建议用高质量的胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒。
2. 线性化质粒DNA时避免选择产生3’-突出的限制性内切酶。
3. 要在室温条件下配制反应体系，不能在冰上配制，Buffer中的亚精胺 (spermidine) 在低温下会使DNA模板产生沉淀。
4. 按照说明书上列表中的顺序添加反应组分。
5. 体外转录反应产物不可直接冻存，需经纯化后方可冻存。
6. 试剂盒中提供阳性对照模板，可用于疑难排查。

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