Q:如何查询限制性内切酶双酶切最适Buffer？
Promega官网提供限制性内切酶工具（Restriction Enzyme Tool）：
https://www.promega.com.cn/resources/tools/retool/
查询双酶切最适Buffer时，首先在限制性内切酶工具的搜索栏（Choose Enzyme）输入其中一种限制性内切酶的名称，点击列表中对应的酶的名称，页面即展示该酶的信息（Enzyme Info），包括识别位点、反应温度及在各种Buffer里的活性等。页面右侧即为双酶切（Double Digest）查询工具，在下拉列表中选择要用的另外一种酶的名称，下方即会展示这两种酶在各种Buffer里的活性。
https://www.promega.com.cn/resources/tools/retool/
查询双酶切最适Buffer时，首先在限制性内切酶工具的搜索栏（Choose Enzyme）输入其中一种限制性内切酶的名称，点击列表中对应的酶的名称，页面即展示该酶的信息（Enzyme Info），包括识别位点、反应温度及在各种Buffer里的活性等。页面右侧即为双酶切（Double Digest）查询工具，在下拉列表中选择要用的另外一种酶的名称，下方即会展示这两种酶在各种Buffer里的活性。
通常如果两种酶在某种Buffer里的活性均为75%以上，且最适反应温度相同，就可以在该Buffer中进行双酶切，否则建议进行分步酶切。分步酶切即先用一种酶切，经凝胶电泳回收后，再用另外一种酶切，以保证最佳的酶切效果。
如果所选的两种限制性内切酶购自不同品牌，建议进行分步酶切。
