Q:NanoBRET™和NanoBiT®技术研究蛋白-蛋白相互作用有哪些共同点和区别？
NanoBRET™和NanoBiT®技术研究蛋白-蛋白相互作用的共同点：
1. 均为活细胞检测，可对蛋白-蛋白相互作用进行动态监测；
2. 均需构建融合蛋白表达载体，均需进行细胞转染；
3. 按照不同蛋白和标签的组合，以及标签定位方式不同，最多需要构建8个载体，验证8对组合；
4. 通常建议采用瞬时转染的方式，如需构建稳定转染细胞，细胞中需要同时表达两种待测蛋白；
5. 结合特殊的生物发光成像显微镜或成像仪，均可以进行成像检测。
NanoBRET™和NanoBiT®技术的区别：
1. 均为活细胞检测，可对蛋白-蛋白相互作用进行动态监测；
2. 均需构建融合蛋白表达载体，均需进行细胞转染；
3. 按照不同蛋白和标签的组合，以及标签定位方式不同，最多需要构建8个载体，验证8对组合；
4. 通常建议采用瞬时转染的方式，如需构建稳定转染细胞，细胞中需要同时表达两种待测蛋白；
5. 结合特殊的生物发光成像显微镜或成像仪，均可以进行成像检测。
NanoBRET™和NanoBiT®技术的区别：
|
NanoBRET™ |
NanoBiT® |
|
需要带特定滤光片的发光检测仪器 |
普通发光检测仪器全波长检测，无需滤光片 |
|
需要优化光信号供体（NanoLuc®融合蛋白表达载体）和光信号受体（HaloTag®融合蛋白表达载体）的比例 |
通常情况下，LgBiT和SmBiT融合蛋白表达载体的用量比例为1:1即可，无需优化 |
|
需加两种检测试剂，操作流程更长 |
只需加一种检测试剂，操作流程更简单 |
|
数据处理为比值形式，已消除细胞数差异 |
只检测一种发光信号，细胞数对结果有影响 |
|
BRET原理：利用蛋白对空间靠近 |
互补检测原理：利用蛋白亚基的物理相互作用 |
|
提供＞100对预构建的已知相互作用的蛋白对 |
目前提供预构建载体相对较少 |
