激酶生物学与药物研发
蛋白质和脂质激酶会参与多种病理状态分析。因此，激酶生物学是药物研发的关键步骤。几种生物发光法检测可用于测定化合物在生物化学和细胞学中结合或抑制激酶的能力，易于高通量或选择性分析。
Kinase Biochemical Activity Assays
当使用基于ATP/ADP检测的发光法激酶检测筛选化合物时，干扰最小。这些灵敏、性能稳定的检测很容易扩展以满足您的通量需求。
ADP-Glo™ Kinase Assay概述
ADP-Glo™ Kinase Assay具有动力学范围宽，且在低浓度ATP转化为ADP的情况下也能产生高强度信号的特点，非常适合筛选低活性激酶，例如生长因子受体酪氨酸激酶。此外，ADP-Glo™ Kinase Assay可在ATP浓度高达1mM时使用，这对于对ATP具有高Km值的激酶很重要。
浏览ADP-GloTM Kinase Assay说明书请点击此处
ADP-Glo™ Assay 是一种可以和任何激酶和底物联合使用的通用型检测。 此处显示了激酶活性曲线的典型示例。
Kinase Enzyme Systems
使用Kinase EnzymeSystems轻松筛选和分析激酶抑制剂。
- 目前共有379种激酶特异性分析检测系统，包含100+ 突变型！
- 每个Kinase Enzyme System均包括酶、底物和为ADP-Glo™ Assays优化的反应缓冲液
- 所有Kinase Enzyme Systems均提供应用说明指导，以便您可以快速开始实验
- 激酶可以组合的形式提供，适用于进行profiling。（请参见Kinase Selectivity Profiling Systems）
- 点击此处查看激酶及对应产品列表
The Kinase Enzyme Systems Span the Breadth of the Human Kinome
Kinase Selectivity Profiling Systems
Kinase Selectivity Profiling Systems针对快速和简单的激酶分析反应进行了优化（如下图所示），包括激酶和底物组合。这些组合又分为单个激酶家族、或人类激酶组用于广谱激酶分析。这些系统依赖于已被验证的ADP-Glo™Kinase Assay技术，使得激酶分析变得快速且简单。系统也可实现定制化。
- 数小时内即可完成快速周转时间
- 灵活的激酶抑制分析
- 稳定的发光信号可进行批量处理
- 简单的数据分析：点击此处下载激酶选择性Profiling计算用数据表
Kinase Selectivity Profiling System流程示意图
首先将浓缩的激酶和底物/辅因子原液稀释，然后在384孔板中与待测化合物混合。孵育1小时后再使用ADP-Glo™Assay进行检测。产生的发光信号与ADP浓度成正比，并与激酶活性呈线性关系。
Kinase Cellular Assays
NanoBRET™ Target Engagement Intracellular Kinase Assays
NanoBRET™ Target Engagement (TE) Intracellular Kinase Assay 基于NanoBRET™系统，是一种旨在测定活细胞中分子邻近度的能量转移技术。NanoBRET™TE Assay通过竞争性置换NanoBRET™示踪剂来检测待测化合物的表观亲和力，该示踪剂会与细胞中的NanoLuc®萤光素酶-激酶融合蛋白可逆性结合。
- 目前有340多种检测
- 定量检测待测化合物与活细胞中激酶的亲和力和占有率，从而提供更多生理学相关的信息。
- 这些检测可用于测定全长激酶与待测化合物之间的相互作用。
- 即用型-激酶特异性检测，提供了简单的工作流程且可兼容高通量。
- 检测多种激酶抑制剂，例如具有不同结合方式的抑制剂（包括I型、II型、别构和共价结合）
- 使用动力学分析测定待测化合物与激酶结合的有效性（停留时间）
NanoBRET™ Target Engagement Intracellular Kinase Assays的应用
该检测方法可以测定平衡条件下(上图中的上部分)的待测化合物的亲合力，也可以测定非平衡条件下(上图中的下部分)的停留时间。
进行NanoBRET™ TE Kinase Assay需要准备什么？
Promega提供单独的Kinase- Nanoluc®融合载体和相应的NanoBRET™TE Kinase Assay。对于指定的激酶，推荐的NanoBRET™TE Kinase Assay和应用说明指导可以在激酶靶点选择列表中查看。您需要提供细胞和细胞培养试剂。示踪剂和底物/抑制剂组合也可作为独立产品使用。
NanoBRET™ TE Kinase Assay工作流程概述
检测细胞亲和力以及在活细胞中的滞留时间可为化合物与激酶的结合提供更完整的景象。上述示例使用NanoBRET™TEABL1激酶检测和几种靶向慢性粒细胞性白血病（CML）的药物。与第二代（Dasatinib）和第三代（Ponatinib）药物相比，第一代CML药物Imatinib在ABL1上显示出较弱的结合力和更短的停留时间。Ponatinib显示出与Dasatinib相似的亲和力，但停留时间更长。
Phosphorylation and Pathway Analysis
Lumit™ Immunoassay Cellular System是一种进行抗体检测的灵敏的发光法检测系统，可检测磷酸化并研究靶向主要激酶信号通路特殊节点的抑制剂。
- 来自化合物的干扰更少；只需要一台发光检测仪
- 均质型“加样-读数”模式，适用于高通量筛选
- 内源性底物消除了对细胞工程的需求，并且该检测系统可与任何细胞类型相兼容，包括原代细胞
- 检测灵敏度高，可对少量细胞进行测定
- 无需免疫沉淀步骤即可检测磷酸化蛋白
- “DIY”检测系统适用于任何感兴趣的途径或靶标
Lumit™ Immunoassay Cellular System的原理。NanoBiT®萤光素酶的LgBiT和SmBiT亚基偶联至来自两个不同物种(抗兔、抗鼠或抗山羊)的二抗。使用Lumit™兼容的裂解缓冲液(digitonin)裂解细胞，通过添加包含两种抗靶标蛋白的一抗 (用户提供) 以及SmBiT和LgBiT偶联的二抗的抗体混合物来检测靶标蛋白。一抗/Lumit™二抗复合物与其对应的表位结合，使NanoBiT®亚基相互靠近，形成有活性的NanoLuc®萤光素酶，产生与靶标蛋白的量称正比的光信号。
- 产品说明书请点击此处
- 产品应用操作指导
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| Webinar：定量检测活细胞中激酶与靶标的结合（NanoBRET™ TE技术）。 | 激酶抑制剂作用模式的体外研究，以及突变型激酶的耐药机制。 | 用选择性化学探针揭示Dark Kinase(DCLK1)的功能。 |
想了解更多关于蛋白磷酸化和信号通路分析的信息？
