引言
本指南可帮助您了解报告基因检测试剂盒,并确定最适合您需求的试剂盒。请访问Promega目录列表,以查阅本文介绍的报告基因检测试剂盒(Reporter Assays)的订购信息。
报告基因和检测试剂的组成及化学特性
建立萤光素酶报告基因检测方法时,需考虑两项重要因素:萤光素酶报告基因蛋白本身以及用于检测报告基因蛋白活性的试剂的组成和化学特性。这两项因素决定了检测系统的总体性能。通过选择最适合您实验目标的报告基因/检测试剂组合,您可自定义萤光素酶报告基因检测方法,从而建立适用于您所需研究的最佳方案。
萤光素酶报告基因 | 报告基因名称 |
萤火虫萤光素酶 | luc、luc +、luc2、luc2P、luc2CP |
海肾萤光素酶 | Rluc、hRluc、hRlucP、hRlucCP |
NanoLuc®萤光素酶 | Nluc、NlucP、secNluc |
检测试剂注意事项:
对每种报告基因蛋白均可通过多种检测试剂进行检测。选择最佳检测试剂的关键因素包括:
- 检测方法所需的信号强度及其总体动态范围。
- 信号稳定性或半衰期,它会影响您的处理工作流程。
- 所需的处理步骤。非均质型检测需要在添加试剂之前进行单独的裂解物制备步骤。而对于均质型检测,则可以将试剂直接添加至培养的细胞中,无需进行样品预处理。
- 裂解型或活细胞报告基因检测
- 单报告基因或双报告基因检测
萤光素酶信号强度和稳定性
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如图所示,我们比较了用TK-Rluc(海肾)、TK-Fluc(萤火虫)和carrier DNA或TK-Nluc(NanoLuc)、TK-Fluc和carrier DNA按1:1:8比例转染HEK293细胞,并分别使用NanoDLR™、DLR™或Dual-Glo®萤光素酶检测系统进行检测后得到的发光信号。NanoDLR(TM)和Dual-Glo(R)试剂均为信号稳定性增强的均质型检测系统。而DLR(TM)试剂则是非均质型检测系统,具有快速衰减的闪光信号。 | 如图所示,我们展示了用各种萤火虫萤光素酶检测试剂检测QuantiLum®重组萤光素酶稀释液随时间变化的发光信号。Luciferase Assay System采用非均质型试剂,具有信号快速衰减的闪光动力学特征,可提供最明亮的初始发光信号。Bright-Glo™、ONE-Glo™、ONE-Glo™ EX和Steady-Glo®系统均为均质型试剂,这些试剂的初始亮度逐渐降低,但信号半衰期则相应增加。 |