3D培养细胞检测方法专题

3D细胞模型使我们在生理学相关背景下更好的理解生物学的复杂性,对于药物筛选实验,相比2D细胞也可以在进行动物实验前更好的预测药物治疗的体内反应,因此3D细胞培养也是基础、转化和临床的自然整合点。与传统的2D单层细胞培养相比,3D培养能更好的模拟组织形态和细胞微环境。Promega提供监测工具来解决您从可以细胞健康、代谢和基因表达分析。


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细胞健康变化


目前市场上大部分商品化的细胞检测方案,都是针对单层的贴壁培养细胞或者散在的悬浮培养细胞开发的,并不能直接用在3D模型上。3D细胞团中内层细胞与外层细胞相比获得营养和氧气的机会更少,形成自然梯度。目前Promega能够提供的,已经测试过,并且有验证过操作方案的细胞检测方法如下:


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CellTiter-Glo® 3D Cell Viability 

裂解法,基于经典 CTG测原理,专门为检测 3D 微组织球的细胞活力而优化。该检测提供的试剂可以高效的渗透至大的细胞球,相比常规细胞活力检测试剂,具有更强的裂解能力,从而为细胞活力的测定提供更加准确的结果。

G9681,G9682,G9683




细胞代谢变化


近年来Promega的细胞代谢检测工具也逐渐丰富。目前验证过,可以用在3D模型检测的,包括经典的P450酶检测系统,用于氧化应激检测的GSH(谷胱甘肽)、ROS(活性氧簇)检测系统,还有新推出的多个代谢物检测系统,包括葡萄糖,乳糖,谷氨酸、谷氨酰胺等能量代谢物的检测,脂代谢检测系统,包括甘油,甘油三酯,胆固醇/胆固醇酯检测。这些方法大多都可以直接检测释放到上清中的标记物,或者是可以通过优化裂解方法来适应3D系统的检测需求。检测方法如下:


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Glucose-Glo™ Assay

快速、灵敏发光法检测试剂盒,用于检测多种生物样品中的葡萄糖。发光法有效避免了比色法和荧光法中普遍存在的信号干扰问题,也无需进行蛋白样品去除的处理过程。Glucose-Glo™ Assay 适用于检测糖酵解过程中的葡萄糖消耗和糖异生产生的葡萄糖。

J6021,J6022




基因表达变化

2D培养相比,3D培养物中生长的细胞在基因表达方便可能存在差异,细胞与细胞之间的接触,3D培养物中氧气和营养物质的梯度也会影响基因表达。为了分析基因表达插页,必须提取和定量RNA,然后通过RT-qPCR分析特定基因或RNA-seq检测细胞表达变化。



基因组学分析

2D培养相比,3D培养物中生长的细胞在基因表达方便可能存在差异,细胞与细胞之间的接触,3D培养物中氧气和营养物质的梯度也会影响基因表达。为了分析基因表达插页,必须提取和定量RNA,然后通过RT-qPCR分析特定基因或RNA-seq检测细胞表达变化。