T细胞免疫治疗
FDA批准的工程化T细胞疗法涉及用抗原特异性T细胞受体（TCR）或嵌合抗原受体（CAR）对患者自身免疫细胞（自体疗法）进行遗传修饰。当改造过的细胞被重新引入患者体内时，这些精密工程细胞指导患者的免疫系统识别并杀死肿瘤细胞。未来该领域的进展将包括更复杂的功能性T细胞工程、新型细胞疗法( NK和巨噬细胞治疗)以及现成的细胞治疗产品(异体治疗)的可用性。
开发和制造功能复杂的T细胞疗法需要一个同样复杂的生化和细胞分析工具箱。利用我们广泛的生物发光分析技术产品组合，我们已经开发了一套检测方法可以用于：
- 新的抗原特异性TCR和CAR的发现
- T细胞活化和细胞因子产生的测定
- 靶细胞杀伤( TCK )效价检测方法的建立
TCR的发现及表征
利用嵌合抗原受体T细胞（CAR）或转基因T细胞受体（TCR）对T细胞进行基因改造，实现T细胞重定向，这是一种利用重定向T细胞治疗的重要策略，为癌症治疗提供了一种新的治疗范例。为了便于筛选和表征新型转基因TCR，我们开发了两种CD4+或CD8+的TCRαβ-null报告T细胞系。在TCRαβ-null报告T细胞系中重新引入肽特异性TCR α和β链，引起肽依赖性TCR活化。TCRαβ-null报告T细胞系中CD4或CD8的选择性表达能够为MHCI-和MHCII-限制性肿瘤抗原靶点开发转基因TCR。总之，这种生物发光测定为发现和开发T细胞免疫治疗提供了一种新型工具。
我们开发了一系列T Cell Activation Bioassays，通过NFAT或IL-2驱动的萤光素酶报告基因的表达测量TCR信号传导。为了使研究人员能够更好地开发工程化T细胞治疗，我们还创建了一种缺乏内源性TCRαβ链表达的T Cell Activation Bioassay。T Cell Activation Bioassay (TCRαβ-KO)消除了内源性α和β链与转基因TCR的交叉配对，并提供了改良后的检测窗口。
- 测量转基因TCR和CAR的活性和效价
- 缺乏内源性TCRαβ表达的用于生物检测的细胞
- 可提供CD4+、CD8+、CD4+CD8+、CD4-CD8-形式
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使用T Cell Activation Bioassay (TCRαβ-KO, CD4+)测量转基因TCR的活性。图 A利用Positive Control TCR Plasmid（或模拟转染）转染TCRαβ-KO (CD4+) Cells，随后与MHCII APC细胞（HLA-DR+细胞）共同培养，提高Positive Control Peptide的浓度。图B 利用T Cell Activation Bioassay（内源性TCR, CD4+）和T Cell Activation Bioassay (TCRαβ-KO, CD4+)测量TCR介导的T细胞活化。T Cell Activation Bioassay细胞与HLA-DR-阳性细胞共同培养，并增加同源肽的数量。根据发光显示，经改造的T细胞一旦与肿瘤细胞上的抗原结合，就会被活化。数据显示，T Cell Activation Bioassay可用于筛选用于T细胞免疫治疗的转基因TCR。
T细胞活化和细胞因子的生成
细胞因子的生成，特别是IFN-γ和IL-2，是活化的细胞毒性T细胞的特征。我们利用新型Lumit™ Immunoassay平台开发了T细胞细胞因子免疫测定。这种检测为关键细胞因子（例如IL-2和IFN-γ）的释放提供了敏感的生物发光测定。
Lumit™免疫检测系统测量了活化的CD8 T细胞中IL-2和IFN-γ的生成。纯化的CD8+ T细胞（效应细胞）与Raji B细胞（靶细胞）和Blincyto®（CD3xCD19双特异性T细胞衔接器）系列稀释液混合，利用相应的Lumit™ Cytokine Immunoassays测量IFN-γ（图A）和IL-2（图B）的水平，以检测从效应细胞中释放的细胞因子。
靶细胞杀伤（TCK）
利用效应细胞靶向杀伤肿瘤或感染细胞是许多免疫治疗药物的主要作用机制。因此，在药物开发时，证明其对靶细胞具有强大的特异性杀伤能力是十分必要的。传统的细胞毒性检测并不能区分靶细胞和效应细胞。另外，靶细胞特异性检测通常费时耗力，需要放射性或荧光标记。
HiBiT Target Cell Killing生物检测平台是简单、均质型的方法，灵敏度较高，提供了一个可靠的检测窗口。该平台可特异性检测多种生物药物诱导的靶细胞杀伤，包括mAbs、双特异性Abs和CAR-T细胞。这些检测方法提供的是经改造的表达HiBiT融合蛋白的常用的靶细胞。杀死靶细胞后，会产生明亮的发光信号。
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延长检测孵育时间可显示系列TCK活性。利用CAR-19或GFP对照慢病毒转染的T细胞效应细胞会以不同的效靶比（E∶T）与HiBiT靶细胞（Ramos）共培养。在孵育24小时（图A）或48小时（图B）后，添加NanoBiT®Extracellular Detection Reagent，可在GloMax®Discover微孔板读数仪上读取发光信号。EC50随时间左移，显示在较低的E：T比下连续的TCK活性。
