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萤光素酶技术在3D细胞检测中的应用
课程概要
目前,3D细胞培养越来越受欢迎,与传统的2D单层细胞培养相比,3D培养能更好的模拟组织形态和细胞微环境。3D细胞模型使我们在生理学相关背景下更好的理解生物学的复杂性,对于药物筛选实验,相比2D细胞也可以在进行动物实验前更好的预测药物治疗的体内反应,因此3D细胞培养也是基础、转化和临床的自然整合点。
- 3D细胞培养优势
- 3D培养模型研究路线
- 3D培养物分析面临的挑战
- 如何选择合适的3D培养物分析方案
- 3D培养物分析工具应用
讲座主要相关产品
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GSH/GSSG-Glo™ Assay
用于检测和定量细胞中总谷胱甘肽(GSH+GSSG)、GSSG以及GSH/GSSG比率的检测系统
采用生物发光法以及简单的多孔板操作模式V6611, V6612 -
CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay
基于CellTiter-Glo® ATP检测方法,转为3D培养物细胞活力检测设计
适用于类器官、3D微球体等多种3D培养物
具有超强的渗透裂解能力,操作简单
灵敏度更高,适合高通量培养
兼容如Matrige等常用3D培养系统G9681, G9682, G9683 -
RealTime-Glo™ MT Cell Viability Assay
非裂解性、均质、实时、生物发光法细胞活力检测系统
检测细胞还原电位继而反应出细胞的代谢情况及数量
最长可在同一孔中72小时实时监测细胞活力
节省时间、细胞培养和试剂成本G9711, G9712, G9713 -
RealTime-Glo™ Annexin V Apoptosis and Necrosis Assay
基于多孔板检测的实时凋亡检测
无需裂解,可实时监测凋亡进程中的磷脂酰丝氨酸(PS) 从膜内到膜外的外翻
无需洗涤,直接“加样-读数”,可对一个孔进行多次检测
兼容高通量筛选应用JA1011, JA1012, JA1000, JA1001 -
Caspase-Glo® 3/7 Assay System
Caspase 3/7活性检测用于凋亡检测
高灵敏度生物发光法,不受其它Caspase干扰,需要更少的细胞和更少的酶
简单的添加-混合-检测方案,无需样品准备。可扩展至96孔、384孔和1536高通量孔板格式,可进行批量处理
性能经过验证,可靠性强:该试剂盒在纯酶检测和细胞检测时都有出色的Z' 值G8090, G8091, G8092, G8093 -
Caspase-Glo® 3/7 3D Assay
在3D模型中定量检测Caspase 3/7活性以表征细胞凋亡
简单的“加样-混合-检测”方案,无需样品准备
高灵敏度生物发光法,也可扩展至96孔和384孔板格式
可用于多种3D细胞模型,包括由超低吸附表面化学物质产生的球状体和嵌入Matrigel®基质的微团G8981, G8982, G8983 -
LDH-Glo™ Cytotoxicity Assay
简单、更灵敏地生物发光检测LDH的方法,确定细胞毒性
检测从少量细胞,包括3D细胞模型,释放的LDH
可在同一个孔进行多时间点取样检测
可与其它细胞检测法进行多重检测,每孔可得到更多数据J2380, J2381 -
CellTox™ Green Cytotoxicity Assay
专利荧光染料结合DNA双链,对细胞无毒性作用
检测由于细胞死亡引起的细胞膜完整性变化
可选择终点法或在长达72小时实时监测细胞毒性
可以与其他细胞健康检测试剂盒多重叠加使用G8741, G8742, G8743, G8731 -
RealTime-Glo™ Extracellular ATP Assay
非裂解型试剂,无需分离细胞提取上清中的ATP,检测活细胞释放的胞外ATP
可以在给药或刺激细胞后,实时监测活细胞培养物的胞外ATP释放长达24小时
可兼容96孔板或384孔板高通量检测
均质型发光检测方法,灵敏度高,线性范围大
操作简单,只需“加样-混合-检测”GA5010, GA5011, GA5012 -
Autophagy LC3 HiBiT Reporter Assay System
定量且结果明确的 LC3 报告基因检测
“加样-混合-检测”的一步法操作,无需洗涤,也不再需要复杂的成像系统或流式细胞仪,可扩展到高通量应用
提供报告基因稳转细胞系,也提供载体+检测试剂
可检测2D和3D培养物GA2550, GA1040, GA1050 -
NAD/NADH-Glo™ and NADP/NADPH-Glo™ Assays
用于检测总的氧化型和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( NAD(P)+ and NAD(P)H )的生物发光检测法
简单的“加样-混合-检测”操作方案和灵活、可扩展的检测法
非常适合高通量筛选小分子化合物对 NAD(P)与 NAD(P)H 水平的影响G9071, G9072, G9081, G9082 -
Glucose-Glo™ Assay
一种快速、灵敏的生物发光法,用于检测葡萄糖水平的微小改变
在多种样本类型中检测葡萄糖水平
检测限低至nM水平
避免了比色法和荧光法中普遍存在的信号干扰问题,信号背景比>1,000J6021, J6022 -
Lactate-Glo™ Assay
一种快速、灵敏的从多种样品类型中检测乳酸的方法
基于多孔板的操作,可进行高通量检测
可与其他代谢物检测或细胞活力系统进行叠加检测
线性范围高达200µMJ5021, J5022 -
Glutamine/Glutamate-Glo™ Assay
一种快速、灵敏的检测生物样本中谷氨酰胺和谷氨酸的方法
生物发光信号有效避了比色和荧光分析受到的信号干扰
能够检测到代谢物的微小变化
可以与其他代谢物或活性检测方法同时进行
适用于多种样本类型J8021, J8022 -
Glutamate-Glo™ Assay
一种快速、灵敏和有选择性地检测生物和细胞样品中的谷氨酸水平变化的检测方法
可用于高通量检测
检测限低至nM水平
生物发光信号有效避了比色和荧光分析受到的信号干扰J7021, J7022 -
Malate-Glo™ Assay
简单、灵敏的L-苹果酸检测试剂盒
适用于培养细胞、组织匀浆和血清样本
生物发光检测,灵敏度高,可以检测线粒体代谢和TCA周期的细微变化
方法操作简单,无需细胞收集和离心,可拓展到96至384孔板,适用于高通量检测JE9100, JE9200 -
BCAA-Glo™ Assay
试剂盒可检测的BCAA包括:亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸
生物发光法,灵敏度高,可检测支链氨基酸代谢和丰度的细微变化
用于检测各种生物样品(哺乳动物细胞、细胞培养基、组织和血清)中的BCAA
方法操作简单,无需细胞收集和离心,可拓展到96至384孔板,适用于高通量检测JE9300, JE9400 -
BHB-Glo™ (Ketone Body) Assay
易于操作、灵敏的β-羟基丁酸(BHB)测定试剂盒
BHB是在低血糖条件下,如饥饿或长时间运动期间,由肝脏中的脂肪酸合成的一种酮体
用于检测各种生物样品(哺乳动物细胞、细胞培养基、组织和血清)中的BHB
生物发光检测,灵敏度高,可以检测酮症以及酮体消耗和分泌的细微变化
方法操作简单,无需细胞收集和离心,可拓展到96至384孔板,适用于高通量检测JE9500, JE9600 -
Pyruvate-Glo™ Assay
简单、灵敏的丙酮酸检测试剂盒
适用于培养细胞、培养基和血清样本
生物发光检测,灵敏度高,可以在短短75分钟内检测糖酵解和线粒体代谢的细微变化
方法操作简单,无需细胞收集和离心,可拓展到96至384孔板,适用于高通量检测J4051, J4052 -
Glycerol-Glo™ Assay
简单、灵敏的从多种生物样本中检测甘油水平
适用于细胞裂解物、组织、细胞培养基和血清样本
可在96和384孔板中进行,检测试剂可被直接添加到样品中,无需有机萃取,更适用于高通量应用
采用生物发光法,甘油检测线性范围高达80μMJ3150, J3151 -
Triglyceride-Glo™ Assay
从多种生物样本中检测甘油三酯
适用于细胞培养基、血清和组织匀浆样本
无需有机提取、极端高温或离心操作
甘油三酯检测线性范围高达80µM
可在96和384孔板中进行,检测试剂可被直接添加到样品中,适用于高通量应用J3160, J3161 -
Cholesterol/Cholesterol Ester-Glo™ Assay
从多种生物样本中检测胆固醇和胆固醇酯
适用于细胞裂解物、组织、培养基和血清样本
无需有机提取,检测试剂可被直接添加到样品中,适合高通量应用
胆固醇检测线性范围高达80μMJ3190, J3191 -
ROS-Glo™ H₂O₂ Assay
一种均质、快速、灵敏的生物发光检测法,特异性、直接检测过氧化氢(H₂O₂)
快速的检测法涉及简单的两步试剂添加方案
底物直接与过氧化氢反应;无需HRP作为偶联酶G8820, G8821 -
GSH-Glo™ Glutathione Assay
用于检测和定量细胞和生物样品中的谷胱甘肽(GSH)
采用生物发光法以及简单的多孔板操作模式V6911, V6912 -
Dehydrogenase-Glo™ Detection System
灵敏地检测脱氢酶活性,由用户提供特异性脱氢酶底物建立自己的特异性脱氢酶检测系统
利用生物发光法NAD(P)H检测原理,用于检测细胞裂解物,组织匀浆和其他样品中的脱氢酶活性
可从仅仅数十个细胞中极其灵敏地检测脱氢酶活性,能够对主要代谢途径进行功能性分析J9010, J9020 -
Metabolite-Glo™ Detection System
用户提供特异性脱氢酶,可建立自己的特异性代谢物检测系统
生物发光法NAD(P)H检测原理
适用于培养细胞、培养基样本、组织匀浆和血清样本
方法操作简单,无需细胞收集和离心,可拓展到96至384孔板,适用于高通量检测J9030, J9040 -
ReliaPrep™ RNA Miniprep Systems
从至少100个细胞或0.25mg组织中高效纯化RNA
简单的30分钟操作方案
在小体积中洗脱,产生高度浓缩的RNA
无需酚/氯仿或β-巯基乙醇Z6010, Z6011, Z6012, Z6110, Z6111, Z6112 -
GoTaq® qPCR and RT-qPCR Systems
可方便用于实时定量PCR和RT-qPCR的预混液
基于染料的定量PCR(qPCR)或RT-qPCR即用型预混液,组分经过优化
与快速和标准循环方法均兼容
可耐受多种PCR抑制剂A6000, A6001, A6002, A6021, A6020, A6011, A6010 -
GoTaq® Probe qPCR and RT-qPCR Systems
探针法实时qPCR和RT-qPCR预混液
即用型的系统强大的qPCR和RT-qPCR混合液,组分经过优化,配合水解探针使用。
与使用 TaqMan®和其他探针(分子信标)的实时PCR仪的快速和标准扩增方法均兼容
对大部分PCR抑制剂有抗性A6100, A6101, A6102, A6120, A6121, A6110 -
Lumit® Glucagon Immunoassay
无需洗涤的胰高血糖素免疫检测
快速的“添加-读取”流程
使用任何板读式发光检测仪进行发光检测
灵活、可扩展的通量:使用W8020在96孔板格式下进行100次检测或在384孔板格式下进行400次检测;使用W8022可进行500至2000次检测W8020, W8022 -
GloMax® Discover System
直观的触摸显示屏和预置程序使您方便简单的得到数据和分析结果。
经过优化的,系统中预置 50多个Promega程序,减少您优化仪器设置的时间。
可进行滤光片式化学发光、荧光、紫外-可见光吸光度、生物发光共振能量转移 ( BRET ) 和荧光共振能量转移 ( FRET ) 检测,还可定制滤光片。
6至384孔微孔板的灵活检测模式。
可放置于实验台上或整合进大的自动化平台以实现高通量。
更宽的动态范围使您在同一次试验中检测高值和低值样品,更高的灵敏度适于检测低水平样品,更低的孔间干扰。GM3000 -
Promoterless NanoLuc® Genetic Reporter Basic Vectors
插入假定的启动子以驱动NanoLuc®萤光素酶的表达。
多重克隆位点提供了一系列的限制位点用于克隆。
提供两种工程化的基因用于您的报告基因检测:Nluc和NlucP。
NanoLuc®酶及其底物比其他萤光素酶亮约100倍,产生高强度、辉光型发光。N1001, N1011 -
Secreted NanoLuc® Genetic Reporter Vectors
在哺乳动物细胞中表达分泌型报告基因蛋白的载体
带有分泌序列的NanoLuc®萤光素酶报告基因,用于细胞外表达
选择不同的启动子用于克隆潜在的调控元件,或用作对照报告基因载体
提供潮霉素筛选,用于稳定表达的载体N1021, N1101, N1081, N1051 -
Minimal Promoter-Driven NanoLuc® Genetic Reporter Vectors
克隆感兴趣的应答元件以驱动NanoLuc®萤光素酶的表达
Nluc基因针对哺乳动物细胞进行了密码子优化
移除了许多潜在的调控元件或其他不良特征(如常见的限制性内切酶位点)
载体基于pGL4骨架,便于从现有质粒中轻松转移序列N1031, N1041 -
Promoterless NanoLuc® Genetic Reporter Vectors with Hygromycin Selection
用于克隆假定的启动子以在哺乳动物细胞中表达,并且可以选择稳定转染细胞
提供两种工程化的基因用于您的报告基因检测:Nluc和NlucP
NanoLuc®酶及其底物比其他萤光素酶亮约100倍,产生高强度、辉光型发光
可用于瞬时转染或使用潮霉素进行稳定表达N1061, N1071 -
Promoter-Driven Control NanoLuc® Luciferase Vectors
含有NanoLuc®萤光素酶的载体,由哺乳动物启动子驱动表达
多种启动子选项(CMV、TK和PGK)可供选择,以在您的实验系统中获得适当水平的对照报告基因。
与实验性萤火虫萤光素酶载体共转染,作为标准化对照。
在双报告基因实验中使用Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter(NanoDLR™)检测系统进行信号测量N1441, N1501, N1091 -
NanoLuc® Reporter Vector with NF-κB Response Element
在NF-κB存在下表达NanoLuc®萤光素酶的载体
能够响应细胞中NF-κB表达的变化
包含一个优化的NanoLuc®萤光素酶基因,编码的报告基因蛋白具有更短的半衰期(NlucP)
带有潮霉素抗性筛选标记,意味着可以选择进行瞬时转染或生成稳定细胞系N1111 -
Control NanoLuc® Reporter Vector with Hygromycin Selection
使用CMV启动子表达NanoLuc®萤光素酶的载体
用作NanoLuc®融合载体的对照载体
包含一个优化的NanoLuc®萤光素酶基因,编码的报告基因蛋白具有更短的半衰期(NlucP)
潮霉素抗性筛选标记意味着可以选择进行瞬时转染或生成稳定细胞系N1411 -
pFN31 and pFC32 NanoLuc® Protein Fusion Flexi® Vectors
用于与NanoLuc®萤光素酶报告基因的N端或C端融合
使用Flexi®载体系统插入感兴趣的蛋白
选择N端或C端的NanoLuc®融合和抗生素抗性(氨苄青霉素或卡那霉素)
明亮的NanoLuc®报告基因允许融合蛋白以内源水平表达,从而获得更生理相关的结果N1311, N1321, N1331, N1341 -
pNLF1 NanoLuc® Protein Fusion Vectors
生成与NanoLuc®酶的N-或C-末端融合,或与N-末端分泌型NanoLuc®萤光素酶的融合
使用传统的克隆技术将感兴趣的蛋白插入到多克隆位点(MCS)中
明亮的NanoLuc®报告基因使得融合蛋白能够实现内源水平表达,从而获得更具生物学相关性的结果
选择瞬时转染或使用潮霉素筛选稳定表达N1361, N1351, N1371 -
NanoLuc® Stability Sensors for Cell Signaling
检测HIF1A和NRF2细胞内蛋白质周转的载体
预设计的即用型构建体经过优化和测试,以确保低内毒素水平
在pNLF1-HIF1A [CMV/neo]载体中,HIF1A在 NanoLuc®萤光素酶报告基因的C末端融合
NRF2载体系统包括表达与NanoLuc®萤光素酶C末端融合的pNLF1-NRF2 [CMV/neo]载体,和一个表达pKEAP1的载体,后者用于调节细胞内NRF2水平N1381, N1391 -
Nano-Glo® Luciferase Assay
加样-混合-检测模式,检测NanoLuc®萤光素酶
明亮的 NanoLuc® 报告基因可用于灵敏度受限的应用中
添加-读取的步骤简单,可扩展到高通量应用
扩展的强光输出优化用于批量和连续处理N1110, N1120, N1130, N1150 -
Nano-Glo® In-Gel Detection System
直接检测聚丙烯酰胺凝胶中的 NanoLuc® 融合蛋白
只需用试剂孵育非变性凝胶或 SDS 变性凝胶并成像
检测时无需转移到膜上
无需封闭或加入抗体N3020 -
Nano-Glo® Live Cell Assay System
在活细胞中检测NanoLuc®发光信号
底物和缓冲液经过优化,可提高试剂稳定性
用于检测 NanoBiT® 蛋白互补或 NanoLuc® 报告基因活性
可在单个时间点或连续长达 2 小时的时间内监测发光,而不会影响细胞活力N2011, N2012, N2013 -
Nano-Glo Extended Live Cell Substrates
可在数小时或数天内对 NanoLuc® 或 NanoBiT® 报告基因活性进行活细胞检测
增强的信号稳定性,可对报告基因活性进行更长时间的实时动力学分析
通过测量同一样本在一段时间内的反应,简化时间进程研究
可灵敏地检测内源水平的蛋白质--无需过表达N2570, N2571, N2572, N2580, N2581, N2582, N2590 -
Nano-Glo® Dual-Luciferase® Reporter Assay System
超灵敏检测单个样品中的萤火虫和 NanoLuc® 萤光素酶活性
低表达水平时灵敏度更高
可选择萤火虫或 NanoLuc® 萤光素酶作为主报告基因
试剂稳定性的提高为检测设计带来了更大的灵活性N1610, N1620, N1630, N1650 -
Coincidence Reporter Vectors
同一个转录本中表达萤火虫萤光素酶和NanoLuc®萤光素酶的载体
萤火虫萤光素酶和NanoLuc®萤光素酶具有不同的化合物干扰特性,与单独使用时相比更有助于识别假阳性
使用两种不同的转录报告基因可以降低假阳性率,增加真正生物学效应的识别
luc2和NlucP提供了一个明亮的报告基因组合,与低拷贝数和大规模读板检测兼容,并提供更高的信号背景比N1461, N1471, N1481, N1491 -
NanoBiT® PPI Starter Systems
在活细胞中灵敏地检测蛋白相互作用
可在蛋白低表达水平下检测,可在活细胞水平实时动态监测蛋白相互作用
可逆的蛋白互补报告子,可分析蛋白相互作用和分离
与基于萤火虫萤光素酶的split技术相比,灵敏度和精确度更高N2014, N2015, N2016 -
HiBiT CMV-Neo Flexi® Vectors
用于表达发光法分析的HiBiT标记蛋白的载体
将HiBiT标签添加到您感兴趣的蛋白N-或C-末端
生成N-末端HiBiT标记的跨膜或分泌蛋白
与Flexi®克隆系统一起使用以转移ORF插入片段N2391, N2401, N2411 -
pBiT3.1 HiBiT MCS Vectors
用于生成HiBiT标记蛋白的传统克隆载体
将HiBiT标签添加到您感兴趣的蛋白N-或C-末端
生成N-末端HiBiT标记的跨膜或分泌蛋白
用于使用发光检测试剂的表达分析和蛋白定量N2371, N2361, N2381 -
Nano-Glo® HiBiT Blotting System
快速发光法蛋白印迹检测
在印迹膜上确定蛋白分子量和定量蛋白表达
整个检测操作仅需要几分钟,操作步骤极少
灵敏度达到飞克级,在五个数量级内成正比N2410 -
Nano-Glo® HiBiT Lytic Detection System
准确定量细胞中表达的任何HiBiT标记蛋白
灵敏的生物发光蛋白检测
简单的添加-读取检测——无需抗体
定量超过7个数量级的线性动态范围N3030, N3040, N3050 -
Nano-Glo® HiBiT Extracellular Detection System
定量细胞表面表达的HiBiT标记蛋白
特异性检测活细胞的细胞外表达蛋白或分泌蛋白
简单的添加-混合-读取检测模式——无需抗体
定量超过7个数量级的线性动态范围N2420, N2421, N2422 -
HaloPROTAC3
HaloTag® 融合蛋白的小分子降解剂
特异性和可控的蛋白质降解
使用HaloTag®荧光配基,通过FACS®分选技术对CRISPR/Cas9 HaloTag®编辑细胞进行特异性富集
通过将HiBiT标签添加到HaloTag®融合蛋白中,可以方便地进行蛋白降解的发光检测GA4110, GA3110