培训班回顾
2021年9月16日，由Promega携手罗氏研发(中国)有限公司共同举办的“蛋白相互作用研究方法及应用技术培训班”已圆满落幕，本次会议我们特别邀请到了上海罗氏创新中心全自动化高通量药物筛选负责人，林赵虎博士，以及Promega技术专家，高淳之博士，为大家带来蛋白相互作用检测技术以及其在高通量药物筛选中的应用。错过直播的你也不用担心，回放及留言解答都为你备好啦！
由于培训班直播现场时间有限，嘉宾未来得及一一解答大家的问题，因此我们将直播间剩余未解答的问题进行了整理，并请我们的技术专家做了详细解答。希望这部分内容能为大家的研究工作带来参考。
NanoBiT适合研究Molecular glue degrader引起的E3和靶蛋白的互作研究吗？因为形成的是Temnary complex，NanoBiT是否可以检测到？
答：三元复合物的形成可以用NanoBRET™技术进行研究，我们有NanoBRET™ VHL and CRBN Ternary Complex Starter Kits用于PROTAC研究，应当也可以尝试用于Molecular glue degrader。因为在三元复合物形成后，靶蛋白可能会被降解，而NanoBiT是直接测量发光值，检测到的信号会显著降低，因此不适合此应用。而NanoBRET™ 方法是基于比例的计算，虽然供体蛋白的减少会降低绝对值和检测窗口，但仍然可用。
构建NanoLuc Stable cell line的时候选择过表达还是KI的方式，过表达的话用什么promoter比较合适？
答：通过KI来实现内源水平的表达，通常能得到最好的应答反应，是比较推荐的。如果是瞬时转染，根据研发科学家的经验，使用TK、PGK等中等强度的启动子，或者多倍稀释过的CMV、SV40，降低过表达量，可以有更好的应答。
请问今天介绍的两方面都是过表达蛋白到工具细胞，请问如果想针对细胞天然表达的蛋白可以运用到这两个技术吗？
答：这两个技术都需要对研究的蛋白进行改造，如果是研究内源水平表达的蛋白，可以考虑通过基因编辑的方法将标签插入靶蛋白的基因组中。
Exogenous 和endogenous 的蛋白PPI会有不一样吗？
答：外源过表达可能会造成生物学假象，有时会与内源表达的蛋白PPI有差异。所以在进行相关的实验时，调整蛋白的表达水平是很有必要的。
NanoBRTE和NanoBiT是否需要超敏的酶标仪，普通的好像读值很低。
答：NanoBRET对仪器的要求更严格一些，需要有合适滤光片的发光检测仪，仪器灵敏度低，或者滤光片波长、类型不合适，都会大大降低检测的灵敏度。NanoBiT对仪器的要求相对简单，普通的化学发光检测仪就可以。
请问能提供一下两种方法预构建载体的链接吗？
答：NanoBiT® PPI 系统预构建载体较少，可以直接联系技术支持咨询。NanoBRET PPI预构建系统请访问：
这个试剂盒可否运用到植物研究？
答：Promega没有测试过这两种方法在植物中的应用。但是NanoLuc和Halotag都有在植物中应用的文献资料（如下），所以原理上有可行性，只是需要使用者更多的条件摸索和优化。检测底物和配体的透膜性，载体的转染，可能是会遇到的主要问题。
Expanding the bioluminescence reporter toolkit for plant chronobiology with NanoLUC.
Lang, C, et al. "HaloTag a new versatile reporter gene system in plant cells." J Exp Bot. 2006. 57(12): 2985-2992.
以上答案仅供参考，如有任何问题请联系Promega！
Promega公司成立于1978年，总部设在美国威斯康星州麦迪逊市，在16个国家设有分公司，在全球范围内还有50 多家经销商，服务全球100多个国家。
Promega公司是为生命科学产业提供创新型解决方案和技术支持的领导者。公司拥有4,000多种产品，致力于提高全球范围内的科学家对基因组学、蛋白分析和表达、细胞分析、药物研发、分子诊断和遗传鉴定等领域的认知。
普洛麦格（北京）生物技术有限公司（Promega (Beijing) Biotech Co., Ltd）是Promega公司在中国大陆地区的分公司，于2005年成立。
今年是Promega第一个商品化萤光素酶报告基因及检测系统诞生30周年。几十年来，Promega在这个领域一直不断深耕，持续推出革新性的萤光素酶应用产品。
Promega产品不仅被生命科学研究者用于对生物学基本问题的理论研究，也被广泛用于应用科学领域，以帮助诊断、疾病治疗、发现新的治疗方法以及应用遗传和DNA测试进行人类遗传鉴定。
Promega在多个重要领域拥有重要的知识产权和许可，包括：
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生物发光，包括基因工程改造的萤光素酶、萤光素酶载体和底物
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短串联重复 (STR) 分析用于基于 STR 分析的细胞系鉴定、人类遗传鉴定、细胞和组织鉴定及混合样本检测
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HaloTag® 蛋白标记和捕获技术
