【技术】均质型生物发光法用于检测 GSIS(葡萄糖刺激的胰岛素分泌)

来源：发布时间：2022/4/1 15:34:00

均质型生物发光法用于检测

GSIS(葡萄糖刺激的胰岛素分泌)

葡萄糖、脂质、蛋白质和氨基酸代谢之间的相互作用是复杂的，必须根据环境的变化进行精细的调节。胰岛素和胰高血糖素等激素在细胞、器官以及整个有机体水平的内环境联系和协调代谢途径方面起着核心作用。

传统的ELISA或RIA检测方法需要许多操作步骤，因此检测胰腺细胞或胰岛分泌的胰岛素和胰高血糖素被认为是一项繁重的工作。均质的免疫检测方法减少了所需操作的步骤，并且可扩展到检测大量数据点，例如来自灌注实验的数百或数千个样本。使用Lumit™ Insulin and Glucagon Immunoassays胰岛素和胰高血糖素检测方法，您可以在早上进行高通量的葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)实验，并在下午分析胰岛素和胰高血糖素分泌的数据，使您快速做出实验决策，推进糖尿病研究。

产品优势

技术

优势

用于细胞系和人胰岛微组织模型系统GSIS检测；

所需样品少，可在384孔板中检测，可对大量样品的快速测量，例如进行灌注或筛选实验；

生物发光均质法，灵敏度高，线性范围大。

	Insulin	Glucagon
Linear Range	~10pM to 8nM	~1pM to 1-2 nM
Signal-to Background, maximum	~500	~500
L.O.D (at S/N = 3)	~ 10pM (58 pg/ml)	~1pM (3.4 pg/ml)

Lumit™技术原理

Lumit™ Immunoassays是基于萤光素酶互补系统的新型生物发光、均质、溶液内的免疫分析方法。

在Lumit™免疫检测系统中，两个抗胰岛素抗体或两个抗胰高血糖素抗体分别用NanoLuc^® 萤光素酶的大小亚基（称为SmBiT和LgBiT）进行化学标记。天然条件下大小亚基亲和力极弱，只有在分析物存在的情况下，两种抗体非常接近，从而使SmBiT和LgBiT形成有活性的酶，再加入萤光素酶底物后产生明亮的发光信号。

使用Lumit™技术，您可以在70分钟内从基于细胞的分泌物中得到高质量的数据。该方法操作简单，没有清洗或转移步骤，可以适应多孔板及相应通量的需求。

GSIS葡萄糖刺激的

胰岛素分泌检测实验

INS-1细胞中GSIS检测

上图. 将INS-1大鼠胰岛瘤细胞以100μl体积铺到96孔板中。37°C孵育3天后，将细胞培养基用100μl含葡萄糖的GSIS缓冲液置换，按规定浓度孵育。每个葡萄糖浓度都包含复孔。GSIS样品在37°条件下孵育1小时后采集样品，在384孔板上每次取10μl 使用Lumit™Insulin Immunoassays重复测定胰岛素含量。

3D Insight™ 人胰岛微组织

(InSphero AG) GSIS检测

上图. 使用96孔板每孔放置一个胰岛微组织。用50μl 1.67 mM葡萄糖孵育3组6个胰岛微组织，检测其基本的胰岛素分泌水平。每组再用50μl 1.67 mM、6.7mM或16.7mM葡萄糖在37℃下孵育1小时。采集10μl GSIS样品进行Lumit ™Insulin Immunoassays 免疫检测。3D Insight™人胰岛微组织由瑞士InSphero AG公司提供。

兼容小型化和半自动化配药

Lumit™免疫分析方法易于小型化和自动化分析，可快速测量大量的样品:

胰岛素免疫分析方法在两种384孔板中进行;

常规容量(RV)20μl样品和低容量(LV)6μl样品；

为了加快抗体(20或6μl)和NanoLuc Reagents(10或3μl)的溶液分配，使用了3种半自动化分液器；

Multidrop™Combi nL(ThermoFisher)：nL至μL加压分液；

台式移液器，96通道(Sorenson)：吸头分液；

Mantis^®液体处理器(Formulatrix^®)：正置换芯片分液；

兼容三种分液器（384孔板，常规容量RV）

平板之间的复现性（Combi nL分液器）

上图. 用PBS + 0.1% BSA制备稀释的胰岛素，并使用Tecan Evo MCA 96吸头机械臂抽吸到多个384孔常规体积和低体积板中。每种胰岛素浓度在每板16个孔中进行测定。平均RLU用于计算信背比(Signal-to-Background)、信噪比(Signal-to-Noise)和Zʹ值。Zʹ因子是一个用来表示HTS测定质量的参数，其值>为0.5表示该测定方法是可接受的。误差棒是+/- 1 s.d.，除非另有说明。