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来源：发布时间：2022/4/11 13:03:00

胰岛素水平响应的常见途径

及代谢物检测

Promega研发的核心生物发光代谢物检测技术是一种基于酶偶联的生物发光的NADH检测技术，该技术用于监测关键的代谢途径，如糖酵解、葡萄糖摄取、脂肪分解和脂肪生成。发光检测方法比其他方法更灵敏，并且操作简单，节省了时间可以帮助您更快地进行下一次实验。

生物发光法代谢物检测平台

1. 代谢物检测是基于生物发光NAD(P)H检测技术和偶联酶反应；

2. 可用于多种代谢物的快速检测；

3. 样品类型包括细胞培养基，细胞裂解物和组织匀浆。

4. 操作简单，灵敏度高。

胰岛素水平响应的常见途径

// 脂肪生成Lipogenesis

在胰岛素作用下，脂肪细胞和肝细胞中甘油三酯和其他脂质分子的生成上调。通过这种方式，胰岛素促进了脂质分子的生成和存储。胰岛素水平的升高向细胞表明能量（葡萄糖）充足，应该储存起来。脂肪生成导致甘油三酯水平的增加可以使用Triglyceride-Glo™ Assay来检测。

实验：脂肪细胞分化过程中甘油三酯的积累检测

对中性脂质进行染色是监测甘油三酯变化的常用方法，下图中油红O（Oil Red O）染色提供了脂质堆积的定性图像，而Triglyceride-Glo™ Assay提供了定量检测。

A -初始的成纤维细胞（3T3L1-MBX细胞，第5天）

B -分化阶段1（第12天）

C -分化阶段2（第14天）

D -分化为成熟的脂肪细胞（第21天）

E -使用 Triglyceride-Glo™ Assay 进行定量检测（请参见 Glucose Uptake-Glo™ Assay 技术手册 #TM467 5.B 节中成纤维细胞分化为脂肪细胞的建议）。在分化的每一个阶段中，进行培养基移除、细胞清洗和脂肪酶处理后，将处理过的2.5µl样品试液稀释于47.5µl Glycerol Lysis Solution 中，并根据标准操作方法进行检测。数据为六次重复试验的平均值，并通过测量总甘油确定甘油三酯浓度。

// 脂肪分解Lipolysis

脂肪分解是将甘油三酯分解成甘油和三个脂肪酸的分子。胰岛素抑制脂肪分解，因此当胰岛素水平升高时，细胞优先使用葡萄糖。脂肪分解的结果是甘油分子的增加，这可以通过Glycerol-Glo™ Assay来检测。

// 糖异生Gluconeogenesis

在胰岛素水平升高的细胞中，新的葡萄糖分子的生成受到抑制。因为胰岛素在葡萄糖升高时也升高，胰岛素向细胞发出信号，从而使其不再产生葡萄糖，而是利用现有的葡萄糖。葡萄糖水平可以通过Glucose-Glo™ Assay来检测。

实验：胰岛素对脂肪分解和糖异生的抑制作用

上图. 由3T3-L1 MBX成纤维细胞分化而成的脂肪细胞可作为研究胰岛素对葡萄糖摄取和脂肪分解作用的有用模型。

上图. 3T3-L1 MBX脂肪细胞分别清洗并用异丙肾上腺素isoproterenol (25nM)和胰岛素Insulin(150nM)不同组合处理90分钟。然后用Glycerol-Glo™ Assay对培养基进行检测。

// 葡萄糖摄取速率Glucose Uptake Rate

胰岛素通过葡萄糖转运蛋白增加细胞摄取葡萄糖的速率，使细胞可以摄取葡萄糖用以储存和使用。Glucose Uptake-Glo™ Assay可用于检测葡萄糖摄取率的增加。

实验：胰岛素对脂肪细胞葡萄糖摄取的刺激作用

上图. 胰岛素刺激3T3-L1 MBX脂肪细胞中GLUT4易位。在我们的Glucose Uptake-Glo™ Assay生物发光法检测中，EC50为0.1 nM，这导致葡萄糖摄取增加了10倍。

上图. 胰岛素刺激的葡萄糖摄取可以被PI3K抑制剂LY294002抑制。用抑制剂处理细胞30分钟，然后用100nM胰岛素处理1小时。测定CellTiter-Glo^® Luminescent Cell Viability Assay细胞活力和Glucose Uptake-Glo™ Assay葡萄糖摄取，IC50分别为88μM和0.5μM。