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FFPE切片提取
FFPE切片是核酸纯化样本中常见又具有一定挑战性的样本类型，高效快速的提取FFPE组织的DNA和RNA是多个应用领域的需求。Promega开发的基于Maxwell® RSC纯化仪的FFPE提取解决方案，为用户提供了高效可靠的工作流程。
这里将为大家详细展示
FFPE切片样本
提取的操作流程
实验材料及实验分析方法
样本：肺癌，乳腺癌，大肠癌的FFPE组织切片(10μm sections)
仪器：Maxwell® RSC Instrument
配套试剂盒:
Maxwell® RSC RNA FFPE Kit (Cat.# AS1440)
Maxwell® RSC DNA FFPE Kit (Cat.# AS1450)
下游实验分析: qPCR和RT-qPCR扩增
操作流程
1. 将FFPE切片放入1.5ml微量离心管中，加入300μl矿物油。涡旋振荡10秒。
2. 样品在80°C温度下加热2分钟。
3. 每份样品用224μl裂解缓冲液(Lysis Buffer)、25μl蛋白酶K(Proteinase K)和1μl蓝色染料(Blue Dye)制备裂解预混液(lysis master mix)。
4. 在每个样品管中加入250μl裂解预混液(lysis master mix)，涡旋振荡5秒。
5. 样品在10000xg下离心30秒。如果存在沉淀，可以吹打混匀样品。
6. 将样品管置于56°C温度下孵育30分钟。
7. 将样品管置于80°C温度下孵育2小时。
8. 取出样品，冷却至室温静置15分钟。
9. 样品以最大速度离心2分钟。
10. 将蓝色水相分入两个微量离心管中（每个约120μl）。
a. RNase处理（管#1—DNA样品）
i. 在水相裂解物（蓝色层）中加入5μl RNase A，吹打混匀。
ii. 置于室温条件下孵育5分钟。
b. DNase处理（管#2—RNA样品）
i. 每份裂解液加入13μl MnCl2、7μl DNase缓冲液和5μl DNase I制备DNase混合液（DNase cocktail）。
ii. 在水相裂解液（蓝色层）中加入25μlDNase混合液(DNase cocktail)，吹打混匀。
iii. 置于室温条件下孵育15分钟。
11. 设置两个Maxwell® FFPE cartridge（一个来自Maxwell® RSC DNA FFPE试剂盒，一个来自Maxwell® RSC RNA FFPE试剂盒）。将管#1裂解物（含DNA）转移至Maxwell® RSC DNA FFPE cartridge中的孔#1，将管#2裂解物（含RNA）转移至Maxwell® RSC RNA FFPE cartridge中的孔#1。
最终分别以50μl无核酸酶水(Nuclease-Free Water)洗脱。
12. 启动仪器的操作程序：Maxwell® RSC仪器上的DNA FFPE或RNA FFPE操作程序，具体取决于核酸种类。
RESULT
实验结果数据
图1: 从FFPE切片样本中提取的DNA浓度(三种组织类型)。通过对75bp、150bp和300bp靶标进行多重qPCR来测定DNA浓度，并通过人gDNA标准曲线来定量浓度（用试剂盒ProNex® DNA QC Assay ABI 7500/7500FAST（Cat.#NG1002）扩增）。数据显示为n=3的平均值±标准偏差。
图2. 用从FFPE切片中分离的RNA进行RT-qPCR的Cq值（三种组织类型）。用RNA特异性Beta-2微球蛋白引物和GoTaq®1-Step RT-qPCR System（Cat.#A6020）扩增RNA。数据显示为n=3的平均值±标准偏差.
我们可以提供130多份不同样本类型的应用操作说明，为您提供了许多操作细节和提取纯化的数据。
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生物 液体 |
细胞 组织 |
环境 样本 |
微生物 病毒 |
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血液 |
哺乳动物 组织 |
粪便 |
细菌 |
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唾液与 粘液 |
FFPE |
土壤 |
真菌 |
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血浆 血清 |
植物 昆虫 |
水 |
古细菌 |
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尿液 |
拭子 |
废水 |
原生 生物 |
仪器信息表
所有Maxwell®核酸提取仪系列分为1-16通量和1-48通量两种型号的仪器，都带有去污染的紫外线灯和平板电脑的配置。同时可根据需求选配核酸定量用的荧光计仪器QuantusTM Fluorometer。
我们为任何Maxwell®仪器提供现场演示，解答您的问题。如需要更多仪器信息和购买仪器，请拨打下方电话与我们联系。
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关于Promega公司
Promega Corporation是一家为生命科学行业提供高质量解决方案和技术支持的全球领先生物技术企业。在其44年的历史中，Promega已建立了包含有4000多种支持细胞和分子生物学的目录产品和定制产品的组合。如今，Promega开发的萤光素酶(即荧光素酶)等技术推动了活细胞分析、药物发现、分子诊断和人体识别等领域的创新，并且由实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学、制药、临床诊断以及农业和环境检测。Promega总部位于美国威斯康星州麦迪逊市，在16个国家设有分公司，拥有50多家全球经销商。如需获取更多信息，请访问www.promega.com。
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