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T细胞免疫治疗
解决方案
T免疫细胞治疗属于过继性细胞治疗 (adoptive cell therapy, ACT),是指从患者体内取出具有抗癌能力的免疫细胞,在体外增殖修饰,再注射回患者体内,从而达到清除肿瘤细胞的作用。根据细胞来源不同分为自体和同种异体。
美国食品药品监督管理局批准的工程T细胞疗法涉及用抗原特异性T细胞受体(TCRs)或嵌合抗原受体(CARs)对患者自身的免疫细胞进行基因修饰(自体疗法)。当重新引入患者体内时,这些精密工程细胞指示患者的免疫系统识别并杀死肿瘤细胞。该领域未来的进展将包括更复杂的功能性T细胞工程、新型细胞疗法以及现成细胞疗法产品(同种异体疗法)的可用性。
而由于细胞治疗的独特性质,其研发与生产仍面临多方面的挑战,比如提高研发和生产效率,降低污染和并发症风险, 提高患者可及性等等。而有效快捷的体外药效检测是其中非常重要的一环。
功能复杂的T细胞疗法的开发和生产需要能够化繁为简同时灵敏精准又稳定的生化和细胞分析工具。
Promega依赖久经验证的生物发光分析技术以及STR技术,我们开发了一套可用于加速T细胞免疫治疗研究和生产的解决方案,以实现:
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Contents
目录浏览
1. TCR研发与表征
2. CAR-T研发中CAR的活性与效能
3. T细胞活化与细胞因子产生
4. 靶细胞杀伤检测
5. 细胞鉴别
6. 应用文献
重点解决方案
TCR研发与表征
工程化T细胞受体T细胞(TCR-T)是过继性T细胞免疫疗法中的一种,也是现在备受关注的研发方向。其策略是利用转基因T细胞受体(TCR)对T细胞进行基因修饰,实现T细胞定向。
为了促进新的转基因TCR的筛选和表征,Promega开发了基于生物发光技术的生物活性检测系统, TCRαβ缺失的报告基因T细胞系(CD4+或CD8+),为发现和开发基于T细胞的免疫疗法提供了一套新的工具。工具可用于:
筛选Screening
1. 鉴定TCR对于待测肽/HLA的特异性
2. 根据效力/信号强度对候选TCRs进行排序
TCR表征
1. 候选TCR的特异性检测
● 比较TCR对不同突变体肽的反应性
● 比较TCR在不同HLAs条件下对于同 一个肽的反应性
2. 安全性检测-Off Target可能性评估
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CAR-T研发中CAR的活性与效能
嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法是是热度最高的癌症治疗的新方向之一。为了促进新的CAR的筛选和表征,Promega开发了一种生物发光生物活性检测系统-T细胞活化生物检测方法,可研究CAR-T疗法中的CAR的活性与效能。
T细胞活化生物活性检测由基因工程Jurkat T细胞系组成,该细胞系表达由NFAT反应元件(NFAT-RE)或IL-2启动子驱动的萤光素酶报告基因(TCR/CD3效应细胞)。当TCR/CD3效应细胞(NFAT)与适当的TCR/CD3-配体或抗-TCR/CD3抗体结合时,TCR转导细胞内信号,导致NFAT RE介导的发光。类似地,当TCR/CD3效应细胞(IL-2)与抗-TCR/CD3和抗CD28刺激物共同参与时,受体介导的信号传导导致IL-2启动子介导的发光。
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T细胞活化与细胞因子产生
细胞因子的产生,特别是IFN-γ和IL-2,是活化的细胞毒性T细胞的特征。传统的细胞因子ELISA检测方法过程复杂,操作困难。Promega的新型LumitTM免疫检测技术完美解决了传统ELISA的痛点,可快速完成T细胞因子免疫分析。这些检测系统可对关键细胞因子如IL-2和IFN-γ的释放的进行灵敏的生物发光检测。
LumitTM Cytokine Immunoassay 是基于NanoLuc® Binary Technology (NanoBiT®) 技术开发的一种快速、均质型定量检测方法,最快可以在70分钟内检测从培养细胞释放的细胞因子,并且在此过程中无需洗涤,转移样品,快速的“加样- 读数”模式使之适合低中高任意通量检测。只需一台标准的具有发光检测功能的读板仪即可进行检测。该检测系统有卓越的灵敏度(LLODs<10pg/ml)和宽广的线性范围(≥3logs 的细胞因子浓度),从而大大减少了对样品稀释的需求。
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靶细胞杀伤检测
效应细胞对肿瘤或感染细胞的靶向杀伤是许多免疫疗法药物的主要作用机制。因此,有必要在药物开发过程中证明靶细胞的强大和特异性杀伤。
常规的细胞毒性检测不能区分靶细胞和效应细胞。此外,靶细胞特异性检测通常是很费力的,并且需要放射性或荧光标记。HiBiT靶细胞杀伤生物活性检测平台简单、均质、高灵敏度,并提供了一个较大的检测窗口。它能够高度灵敏和特异性地测量多种生物药物诱导的靶细胞杀伤,包括单克隆抗体、双特异性抗体和CAR-T细胞。这些检测系统提供了表达HiBiT融合蛋白的流行靶细胞的选择。一旦靶细胞被杀死,就会产生明亮的发光信号。
可选择性监测靶细胞死亡并且灵敏易用的检测方法将有益于细胞免疫疗法的开发。为了解决这个问题,我们开发了一种方法,利用gain-of-signal 的检测形式和生物发光读数,选择性地量化靶细胞死亡。该方法依赖于在细胞被杀伤后从靶细胞释放HiBiT 标记的蛋白质。
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细胞鉴别
在最新版《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则 ( 试行 )》中对于细胞鉴别提出了明确的要求。在细胞鉴别的部分提到建议采用适用的,特异性强的检测方法,而STR分析方法就是被明确提出可采用的方法之一。
Promega已在STR检测领域可提供最专业高效的STR检测试剂(GenePrint 24 System-
24位点,5色荧光多重复合扩增系统
)和仪器(Spectrum CE毛细管电泳仪),为细胞鉴定提供完整解决方案。
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ABOUT PROMEGA
关于Promega公司
Promega公司是为生命科学产业提供创新型解决方案和技术支持的领导者。公司拥有4,000多种产品组合,为细胞生物学、DNA、RNA和蛋白分析、药物开发、遗传鉴定和分子诊断等多个领域的生命科学工作提供支持。40多年来,这些工具和技术的应用领域不断拓展,如今已被实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学应用、制药、临床诊断以及农业和环境监测等。Promega公司总部位于美国威斯康星州麦迪逊市,在16个国家设有分公司,在全球范围内还有50多个经销商。请访问www.promega.com,以了解更多信息。
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