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来源: 发布时间:2024/5/24 14:45:00

更简单快速的Ki67检测法

Ki-67蛋白,是一种公认的细胞增殖标志物。Ki67在正常细胞中基本不表达,而Ki67在肿瘤组织中高表达。Ki67检测经常应用于:

• 细胞增殖/细胞周期调控的研究 

• 肿瘤诊断与预后 

• 评估癌症治疗效果的一个指标 

• 细胞增殖相关药物筛选


目前检测Ki67的方法经常需要繁琐的洗涤、孵育、固定,这里我们介绍一种新型的基于细胞的,均质型检测方法—Lumit® Ki67 Immunoassay,无需繁琐的操作步骤,完美帮助您提高细胞增殖检测效率!


文末

有奖调研


如果您正在做细胞增殖检测实验,参与文末调研即可获得精美斜挎包。


Lumit® Ki67Immunoassay

● 直接反应细胞增殖:检测细胞增殖标记物Ki67

● 高灵敏度:生物发光法,捕捉微量细胞增殖变化

● 高通量检测:基于多孔板的检测

● 操作简单快速:无需洗涤孵育

● 均质型检测:适用悬浮或贴壁培养的细胞样本

● 使用多功能读板仪即可检测




1

检测原理




一对特异性识别同人Ki67蛋白不同表位的抗体,分别用NanoLuc® 萤光素酶的大小亚基(LgBiT 和SmBiT)进行化学标记。在人Ki67蛋白存在的情况下,两种抗体会非常接近,从而使SmBiT 和LgBiT 形成有活性的NanoBiT® 酶并催化试剂中的底物产生明亮的发光信号。




2

检测步骤




基于96孔板的实验流程为例:

● 处理细胞(如果检测抗增殖活性,建议处理细胞后使用CellTox™ Green检测细胞毒性,以检测细胞膜是否完整性丧失)

● 加入裂解试剂震荡裂解细胞

● 加入标记了大小亚基(LgBiT 和SmBiT)的抗体孵育

● 加入Lumit® 检测试剂后读数


Data



应用数据

1


可定量检测Ki-67蛋白


Lumit® Ki67Immunoassay 能有效检测重组人Ki-67蛋白片段,其检测范围广泛且灵敏度小于10皮摩尔(pM)。通过这一均质的Ki-67免疫检测法,可获得极佳的信号与背景比。


2


针对细胞中Ki-67的特异性检测

将Lumit® Ki67Immunoassay应用于96孔板中,不断增加的HeLa和Jurkat细胞数量会导致检测信号成比例增加。在Ki-67敲除(KO)的HeLa细胞中未检测到特定信号,证明了对Ki-67蛋白的特异性检测。


3


Ki67与细胞毒性检测抗增殖能力

Lumit® Ki67Immunoassay与CellTox™ Green多重检测应用在未经处理及Palbociclib(CDK4/6抑制剂)处理的Jurkat细胞上(每孔20,000个细胞;培养48小时)。可以看到Ki-67检测信号的相对减少远大于活细胞数量的减少,通过活细胞检测归一化处理后计算EC50。




有奖调研



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温馨提示:

● 该活动仅限检测细胞增殖的终端用户参加;

● 礼品数量有限,送完即止;

● 该活动最终解释权归Promega所有。


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Promega公司是为生命科学产业提供创新型解决方案和技术支持的领导者。公司拥有4,000多种产品组合,为细胞生物学、DNA、RNA和蛋白分析、药物开发、遗传鉴定和分子诊断等多个领域的生命科学工作提供支持。40多年来,这些工具和技术的应用领域不断拓展,如今已被实验室科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医学应用、制药、临床诊断以及农业和环境监测等。Promega公司总部位于美国威斯康星州麦迪逊市,在16个国家设有分公司,在全球范围内还有50多个经销商。请访问www.promega.com,以了解更多信息。

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