细胞膜损伤LDH释放检测应用文献：
Cell 揭示细胞焦亡新机制，NINJ1介导膜破裂
LDH释放经常会被用于检测药物或者其他形式导致的细胞毒性，LDH释放可以作为判断细胞膜完整性的重要指标。
哈佛医学院在2024年Cell 上发表“NINJ1 mediates plasma membrane rupture by cutting and releasing membrane disks”的文章。文章表明，细胞焦亡是一种由信号诱导的细胞死亡形式，其特征是质膜破裂。文章提出了一种类似"饼干切割器"的机制，其中蛋白质NINJ1的寡聚化在质膜上打孔并释放出"饼干"状的盘片。
原文链接：
https://doi.org/10.1016/j.cell.2024.03.008
01
文章亮点总结
● NINJ1包含带有弯曲的跨膜螺旋，并形成链状寡聚体。
● NINJ1寡聚体结构具有一个用于膜相互作用的疏水性凹面。
● NINJ1能够溶解脂质体，并在活化的巨噬细胞中形成环状结构。
● 在细胞焦亡过程中，NINJ1切割并脱落膜盘，作用类似于饼干切割器。
文章总结：
膜蛋白NINJ1在细胞焦亡及其他溶解性细胞死亡途径中介导质膜破裂。在这里，我们报告了从NINJ1环中分离出的NINJ1寡聚体的冷冻电镜结构。每个NINJ1亚基包含两亲性（α1, α2）和跨膜（TM）螺旋（α3, α4），并通过TM螺旋和α1主要形成亚基链。α3和α4螺旋是弯曲的，甘氨酸（Gly）残基对功能至关重要。NINJ1寡聚体具有一个凹面的疏水侧，该侧应面向膜，以及由α1和α2形成的凸面的亲水侧，这可能在激活时形成。这种结构观察表明NINJ1可以形成膜盘，与重组NINJ1引起的膜碎片化一致。活细胞和超分辨率成像揭示了质膜上的环状结构，这些结构被释放到培养上清中。释放的NINJ1环绕着内部的膜，如脂质染色所示。因此，NINJ1介导的膜盘形成与Gasdermin介导的孔形成不同，导致膜的丢失和质膜破裂。
02
细胞膜损伤LDH释放检测
作者使用CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay Kit试剂盒进行LDH释放的检测，当细胞膜完整性受损时，LDH会从细胞内释放到细胞外环境中，因此LDH释放可以作为检测细胞焦亡或其他细胞膜通透性死亡的标志物。
NINJ1（ninjurin 1）被认为是在细胞膜破裂和细胞死亡中起关键作用的蛋白。通过检测LDH的释放，可以评估NINJ1在诱导细胞膜破裂和细胞死亡过程中的功能。LDH的释放可以证明细胞膜的物理完整性已经被破坏，从而支持NINJ1的切割作用。
同时LDH释放的检测可以帮助区分不同类型的细胞死亡，比如凋亡（apoptosis）和焦亡（pyroptosis）。在焦亡中，细胞膜会迅速破裂，导致细胞内容物包括LDH的快速释放。在文章中，作者还利用LDH释放检测来评估不同药物处理或NINJ1突变体对细胞膜完整性和细胞死亡的影响。
03
LDH释放检测方法对比
CytoTox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay Kit（G1780）是一种检测细胞膜受到破坏后释放出乳酸脱氢酶（LDH）的量从而检测细胞毒性的检测试剂盒。而这种特性可以应用于多种细胞介导的细胞毒性检测中，检测靶细胞受到效应细胞作用后带来的细胞膜破损从而释放的LDH。
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