概述
蛋白质:蛋白质相互作用(PPIs)对细胞中的几乎所有过程都是必不可少的，因此理解PPIs对于理解正常和疾病状态下的细胞生物学就显得至关重要。目前有许多方法用来描述蛋白质相互作用，使用细胞提取物或活细胞来表达潜在的目标蛋白。
活细胞蛋白相互作用
蛋白互作检测解决方案 蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，其与转录调控网络对调控细胞及其信号传导有着重要意义。Promega的两大优势技术为您的的活细胞蛋白互作研究提供向导。
1. NanoBiT® 技术
是一种基于Promega 最新专利萤光素酶NanoLuc® Luciferase 的二亚单元系统，用来检测活细胞内蛋白质的相互作用。更多详情可查看下方视频讲座介绍。
2. NanoBRET™技术
NanoBRET™ 分析是大幅度改良的BRET 分析平台，使用NanoLuc® luciferase 作为能量供体和HaloTag® 蛋白标记的NanoBRET™ 618 荧光基团作为受体。更多详情可查看下方视频讲座介绍。
3. 活细胞蛋白相互作用检测产品
NanoBiT® PPI MCS Starter System | NanoBiT® PPI Flexi Starter System |
NanoBRET™ PPI MCS Starter System
NanoBRET™ PPI Flexi Starter System
NanoBRET™ Nano-Glo® Standard Detection System | NanoBRET™ Nano-Glo® Kinetic Detection System |
蛋白：DNA相互作用
Promega产品用于研究蛋白质:DNA相互作用，包括凝胶迁移检测和HaloCHIP™系统——这是一种传统染色质免疫沉淀方法的快速替代方法。
1. 技术原理
HaloCHIP™ System（HaloCHIP™ 系统）是为共价捕获细胞内蛋白: DNA 复合物而设计的一种新方法，无需抗体，是普通的染色质免疫共沉淀（ChIP）之外的又一种高效的、有力的替代方案。目的蛋白作为 HaloTag® 融合蛋白在细胞中表达，用甲醛与 DNA 交联，然后被 HaloLink™ Resin 捕获。HaloLink™ Resin 可以与融合蛋白的 HaloTag® 蛋白产生高度特异的共价结合。严格的洗涤步骤可清除与 DNA 结合的非特异蛋白，通过加热，可使 DNA 和融合蛋白之间的交联得到解除，释放出捕获的 DNA 片段，然后该 DNA 片段即可被纯化出来。
2. 技术介绍
观看下述视频，详细了解HaloCHIP™ System的原理及实验操作流程等内容。
3. 技术优势
- 无需自行制备或购买高质量的、昂贵的抗体。
- 更少的实验步骤，24-48 小时内即可得到数据，减少了潜在的实验误差。
- 使用最少量的细胞即可检测蛋白结合模式的微小改变。
Pull-Down系统（细胞裂解物蛋白：蛋白相互作用）
HaloTag® 哺乳动物 Pull-Down 系统用于捕获和纯化细胞内成对的和高等级的蛋白复合物，包括瞬时的或弱相互作用的伴侣蛋白。
1. 原理介绍
HaloTag® 融合蛋白可在哺乳细胞中稳定或瞬时表达,并可用作诱饵去捕捉相互作用的蛋白或蛋白复合物。细胞裂解后，与相互作用的蛋白伴侣结合的HaloTag® 融合蛋白以HaloLink™树脂捕捉。被捕捉的蛋白复合物被轻柔洗涤并使用SDS洗脱缓冲液洗脱(也可使用其他变性剂如8M尿素), 或者以TEV蛋白酶将蛋白复合物从树脂上剪切下来。复性的蛋白复合物可以用于各种不同的分析，如Western blotting和质谱分析。
2. 基本实验流程
3. 特点优势
- 改进的捕捉能力，树脂能够快速共价结合HaloTag蛋白，提高了蛋白伴侣的捕捉能力，包括瞬时结合，背景超低。
- 使用同一个载体即可实现从pull-down到成像研究的转变。
- 与多种下游分析方法兼容，如质谱分析。
- 能够荧光标记HaloTag®融合蛋白，优化蛋白表达水平，确定细胞蛋白定位。
CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统
1. 原理介绍
双杂交系统是用于体内蛋白与蛋白相互作用检测的极为有力的工具。此系统的基础是某些转录因子中的模块结构域：即一种能够结合特异 DNA 序列的 DNA 结合结构域和一种能够与基础转录元件相互作用的转录激活结构域。与 DNA 结合结构域结合在一起的转录激活结构域将促进 RNA 聚合酶 II 复合体在 TATA 盒的组装并增加转录。
2. 相关产品
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