肝脏疾病例如非酒精性肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是没有有效治疗方法的慢性疾病。为了支持研究人员对肝脏疾病的研究，我们提供简单、可靠的方法来测量细胞代谢、氧化应激和炎症。我们的检测方法使用了生物发光技术，检测灵敏度高，操作快速且简单。
Promega肝病研究检测方法具有许多优势：
● 兼容多种样本类型保证项目的连续性——包括简单的细胞模型到复杂的3D类器官和组织样本。
● 发光法检测灵敏度高，可以精确监测生物的变化。
● 更宽的线性范围可以检测代谢物浓度的1,000倍变化，无需任何样品稀释。
● 微孔板形式允许采用高通量快速筛选抑制剂。
什么是非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一个概括的说法，主要是肝脏中的脂肪(包括甘油三酯、游离脂肪酸和胆固醇)过度积累导致的一系列情况。非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)有两种类型，一种是非酒精性脂肪肝(NAFL)，其肝脏几乎没有炎症，另一种是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，其特点是脂肪积聚并伴有炎症和肝脏损伤。如果患者未被确诊为NAFLD，而疾病继续发展最终可能会发展为肝纤维化、肝硬化和原发性肝癌。
NAFLD比较常见，全世界25%以上的成年人都受其影响。然而，目前还没有FDA批准的治疗药物。这种疾病比较复杂，许多环境和遗传因素与疾病的起源和发展有关。更复杂的是，因为肝脏是许多代谢途径的中心，这种疾病的病理是系统性的。因此，监测代谢途径和细胞健康的检测方法对于提高我们对NAFLD的认识和开发该病的治疗方法非常重要。
如何检测甘油三酯稳态和脂肪变性
您可以很轻松的使用Triglyceride-Glo™ Assay检测脂肪变性和脂肪生成。该试剂盒适用于多种样品类型，包括细胞裂解物、培养基、组织匀浆、血清和脂蛋白组分。该方法采用生物发光发检测，与基于多孔板的染色法、比色法或荧光法相比，操作简单、无需清洗且灵敏度高。该方法不采用繁琐的有机萃取，而是采用一种快速洗涤溶解步骤制备脂质样品。同样，Glycerol-Glo™ Assay也可以用来测量脂肪分解中产生的甘油。
应用研究：在NASH细胞模型中评估药物诱导毒性
Kermanizadeh等人的研究中表明，预先存在的疾病在外来生物诱导的肝损伤加剧中至关重要。他们使用Triglyceride-Glo™Assay监测3D人类肝脏组织中的脂质积累，同时使用CellTiter-Glo®2.0监测细胞活力。
如何检测葡萄糖代谢
● 糖异生：即新的葡萄糖分子的合成，可以使用Glucose-Glo™ Assay检测
iPSC人肝脏微球体中胰岛素介导的糖异生抑制
用iCell Hepatocytes 2.0 (Cellular Dynamics)制备人肝脏微球体。将细胞解冻并加入胶原培养5天，然后调整细胞数量大约为2000个细胞/孔并置于GravityTRAP™96孔微球板(Insphero)中。实验当天，将培养基移出，细胞在糖异生培养基中孵育1.5小时，以抑制糖酵解并促进肝脏葡萄糖生成。然后，在糖异生培养基中添加不同浓度的胰岛素以抑制葡萄糖生成，在该培养基中分别培养微球体6小时。6小时后，每孔取25μl培养基至96孔板，使用Glucose-Glo™ Assay （蓝色圆圈）定量检测葡萄糖。当对细胞裂解物进行葡萄糖检测时，也得到了类似的结果（绿色方块）。
● 糖酵解：即葡萄糖分解转化为能量，可以使用Glucose-Glo™ Assays和Lactate-Glo™ Assays检测
● 糖原合成和分解：使用Glycogen-Glo™ Assay检测
● 葡萄糖摄取速率：使用Glucose Uptake-Glo™ Assay检测
应用研究：了解二甲双胍（Metformin）的抗癌作用
Cai等人发现二甲双胍有益于降低HepG2细胞化疗耐药性，有助于改善肝癌化疗。他们使用一系列Promega分析方法(Glucose Uptake-Glo™, Glucose-Glo™, Lactate-Glo™ 和NADP/NADPH-Glo™ Assays)来检测HepG2肝细胞癌细胞中的糖酵解。
如何检测胆固醇和脂蛋白
NAFLD与肝脏胆固醇升高和脂蛋白产生变化有关。Cholesterol/Cholesterol Ester-Glo™ Assay可用于量化总胆固醇水平、游离胆固醇水平和胆固醇酯水平。该方案操作简单并且与细胞裂解物、组织、培养基、血清样本和脂蛋白兼容。
当肝脏中FFA过多时，极低密度脂蛋白(VLDL)被用来将FFA输出到脂肪组织。因此，NAFLD患者血清中低密度脂蛋白(LDL和VLDL)升高，高密度脂蛋白(HDL)降低。在这里，我们使用Cholesterol/Cholesterol Ester-Glo™ Assay来检测人体脂蛋白样品的胆固醇含量。
HepG2细胞用产生ROS的化合物(甲萘醌 或邻苯三酚)或细胞毒性诱导试剂(洋地黄皂苷)处 理，37℃孵育2小时。细胞毒性检测试剂CellTox™ Green染料和H2O2底 物 在 给 药 的 时 候 添 加。CellTox™ Green染料孵育后测定荧光。然后加入ROS-Glo™检测液，孵育20分钟后，测定发光信号。
如何检测氧化应激和细胞死亡
氧化应激是NAFLD进展的重要贡献者。肝脏脂肪变性导致线粒体功能障碍、内质网应激和脂肪毒性，所有这些都有助于过量活性氧(ROS)的产生。ROS的积累是有害的，可导致细胞损伤、死亡和肝纤维化。过度的ROS积累最终会导致细胞死亡，这是NAFLD/NASH发病的另一个关键过程。ROS-Glo™ H2O2 Assay可以用来检测细胞中的氧化应激水平。它使用高灵敏度的生物发光发，无需清洗可以快速检测H2O2。
我们通过使用ROS-Glo™和CellTox™ Cytotoxicity Assay对HepG2细胞中氧化应激和细胞死亡进行多重检测。
HepG2 细胞用产生 ROS 的化合物 ( 甲萘醌 或邻苯三酚 ) 或细胞毒性诱导试剂 ( 洋地黄皂苷 ) 处 理，37℃孵育 2 小时。细胞毒性检测试剂 CellTox™ Green 染料和 H2O2 底 物 在 给 药 的 时 候 添 加。 CellTox™ Green 染料孵育后测定荧光。然后加入 ROS-Glo™ 检测液，孵育 20 分钟后，测定发光信号。
如何检测炎症细胞因子
氧化应激会促进肝脏慢性炎症的发生，包括促炎细胞因子的释放。细胞因子传统是用ELISA检测的，它通常需要多次清洗步骤，花费时间较长。我们提供一种ELISA的替代方案: Lumit™ Immunoassays，操作简单，没有洗涤步骤，检测快速。它们在细胞样品中直接检测包括TNF-a、IL-1b、IL-6、HMGB1等细胞因子和其他许多你感兴趣的分子的释放。
如何在肝脏研究中使用3D细胞模型
为了了解NAFLD复杂的病理生理学，研究人员正转向更多与生理相关的3D细胞模型，如肝微球体和微组织。有兴趣在3D肝脏模型中实施Promega分析吗?参见这些网络研讨会中的例子:
