MSI微卫星不稳定(Microsatellite Instability)已经是现在临床肿瘤诊断和指导用药的重要生物标志物之一。从其被发现至今近30年的时间，它的功能与临床意义得到了深入的研究和反复的验证，与此同时MSI的检测方法也在不断发展。
微卫星(Microsatellite)，基因组中的一类短串联重复DNA序列，一般由1-6个核苷酸组成，呈串联重复排列。由于其核心重复单元重复次数差异，微卫星具有群体多态性。微卫星不稳定性(Microsatellite Instability，MSI)：与正常组织相比，肿瘤中某个微卫星位点由于重复单元的插入或缺失而出现新的微卫星等位基因的现象。
1993年，三个实验室同时发现了一种独特的肿瘤发生机制：研究人员在结直肠癌中寻找杂合性丢失(LOH)时，发现肿瘤组织中的某些非编码区PCR条带的片段大小相比相邻的正常组织发生了变化。进一步研究发现，这些片段大小变化的DNA序列中含有微卫星位点。这种微卫星位点的片段大小改变被证实是由于DNA错配修复缺陷(dMMR)所引起的，这种现象被称之为“微卫星不稳定性”。
MSI检测位点的衍化
Bethesda panel
1997年美国国家癌症研究所（NCI）在美国马里兰州的贝塞斯达（Bethesda）召开了关于MSI鉴定标准的会议，基于本次会议的专家公司，NCI首次给出了MSI的标准化定义:"与正常组织相比，肿瘤组织微卫星位点中重复单元的插入或缺失导致片段长度的变化"。推荐了一组包含两个单核苷酸重复位点BAT-25和BAT-26以及三个双碱基重复位点D2S123、D17S250、D5S345 的微卫星检测panel，称之为Bethesda panel 或 NCI panel。
Pentaplex Panel
2004年，美国国家癌症研究所(NCI)举办的第二次HNPCC研讨会上对MSI的检测进行了修订和补充，主要体现在三个方面：
Pentaplex panel与Bethesda panel相比，具有更高的灵敏度和特异性, 该panel被修订版Bethesda指南推荐。
01
双核苷酸重复的位点在检测存在错配修复缺陷的肿瘤时表现出较低的特异性和灵敏度；对于MSH6突变引起的MSI的检出率低[1]
02
双核苷酸位点本身更趋于不稳定（具有高度多态性），对结果判读难度增大，容易得到错误分类结果。
03
建议用单核苷酸重复位点来检测MSI以提高检测的灵敏度，Suraweera等提出pentaplex panel，该panel中的5个单核苷酸位点（BAT-26、BAT-25、NR-21、NR-22、NR-24）在结直肠癌中检测灵敏度均在95%以上[1]。
Promega panel的诞生
2004年，Bacher等人在266个位点中筛选了敏感性和特异性最高的5个单核苷酸panel（BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27）[2], 同年美国Promega公司公布了全球首个商业化MSI检测试剂盒，基于NCI专家共识，美国Promega 公司开发的MSI Analysis System, Version 1.2试剂盒使用了5个灵敏度更高，特异性更好的单核苷酸重复位点BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24、MONO-27及两个质控的5核苷酸重复位点（Penta-C ＆ Penta-D） 检测MSI，大量的数据显示Promega panel可以表现出更高的灵敏度和准确性，目前已被许多研究引用和认可。
目前Promega的panel受到多版NCCN指南的明确推荐，同时拥有200多篇同行评审文章的验证。Promega的5位点试剂盒已于2021年获得美国FDA审批用于林奇综合征诊断筛查。
目前Promega的panel受到多版NCCN指南的明确推荐，同时拥有200多篇同行评审文章的验证。Promega的5位点试剂盒已于2021年获得美国FDA审批用于林奇综合征诊断筛查。并且与多家药厂合作开发其作为PD-1抑制剂用药的伴随诊断试剂。
01 默沙东
与默沙东(MSD)达成战略合作，在美国和中国开发Promega的MSI检测试剂作为KEYTRUDA® (pembrolizumab)实体瘤用药的伴随诊断试剂。
02 Incyte
与Incyte公司达成战略合作，在美国和欧洲开发Promega的MSI检测试剂作为retifanlimab(瑞弗利单抗)子宫内膜癌用药的伴随诊断试剂。
03 复宏汉霖
与复宏汉霖（Henlius）达成战略合作，在中国开发Promega的MSI检测试剂作为serplulimab(斯鲁利单抗)实体瘤用药的伴随诊断试剂。
不同MSI位点灵敏度和特异性
上图信息来源：Jeffery W Bacher, et al. Development of a Fluorescent Multiplex Assay for Detection of MSI-High Tumors.2004;20(4-5):237-50
参考文献：
Promega MSI检测解决方案
产 品 优 势
Promega 的MSI检测技术是全球领先的"金标准"级MSI检测技术，也是全球第一个商品化的MSI检测系统。Promega的MSI检测技术已经在临床研究中广泛使用了15年以上，并被 200 多篇学术论文引用。比NGS相比 , Promega的MSI技术更简单 , 成本更低，速度 更快，是可负担的标准化方法，与IHC-MMR检测相结合，可将灵敏度和特异性提高到近100%。2021 年，Promega的MSI Analysis System先后获得CE-IVD认证，美国FDA认证。同时，Promega的MSI检测产品目前正在中国进行国家药品监督管理局（NMPA）创新医疗器械特别审批认定的审核，即将作为体外诊断试剂（IVD） 上市。Promega 的MSI 检测产品采用了5个单态单核苷酸重复微卫星位点设计，这也是美国国家癌症研究所 (NCI) 认可的设计。我们采用了一组对检测MSI状态更敏感而特异的位点，从而得到更精准的结果，进而帮助医生对癌症患者评估出最佳治疗选择，包括辅助诊断那些有望受益于免疫抑制剂治疗的患者。
Promega可提供从样本制备到MSI检测的完整解决方案。
Promega已与默沙东，Incyte及Henlius公司达成战略合作，共同开发MSI检测系统将作为其药物的伴随诊断试剂用于临床指导用药。
产 品 信 息
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MSI检测 可用解决方案 (So far RUO) |
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流程 |
产品 |
目录号 |
规格 |
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核酸提取仪 |
Maxwell® CSC System |
AS6000 |
1台 (1-16样本通量) |
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MSI检测 |
MSI Analysis System |
MD1641 |
100 rxns |
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ABOUT PROMEGA
关于Promega公司
Promega公司是为生命科学行业提供创新型解决方案和技术支持的领导者。公司的产品组合达4000多种，可支持一系列生命科学工作，如细胞生物学；DNA、RNA和蛋白质分析；药物研发；人类身份鉴定和分子诊断。40多年来，这些工具和技术的应用不断发展，如今已被实验室的科学家和技术人员用于学术和政府研究、法医、制药、临床诊断以及农业和环境检测。Promega总部位于美国威斯康星州麦迪逊市，在16个国家设有分公司，在全球范围内拥有50多家经销商。更多信息请访问www.promega.com
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