关键词：细胞信号通路，蛋白磷酸化，蛋白质降解，抑制剂筛选，Lumit®免疫检测技术，Lumit®免疫测定细胞系统。
快速了解本篇文章介绍重点。
要点概述
生物发光Lumit® 细胞免疫测定的优势包括：
● 新型Lumit®裂解缓冲液II：使得额外新蛋白质靶点如受体酪氨酸激酶（RTK）磷酸化的检测成为可能。
● 无需细胞工程：直接检测内源性靶标的磷酸化或降解。
● 泛抗Y抗体：Lumit® 免疫测定细胞系统针对RTKs可使用特定Y位点的抗体或泛抗Y抗体。
●适用高通量筛选：便于微型化与高通量筛选（HTS）的应用。
● 均质检测：采用简单的“添加-读取”操作模式。与解决方案中的描述一致。
● 流程简化：相比Western Blot、ELISA 或基于荧光的技术，更快捷且步骤更少。
● 生物发光特性：较少受到化学化合物的干扰。
● 可自定义（DIY）检测模式：Lumit®的二抗可用于任何感兴趣的信号通路。
基本介绍
此前，我们开发了Lumit®免疫测定细胞系统（ICS），用于定量细胞裂解液中各种信号节点。与传统方法不同，Lumit®免疫测定法省去了洗涤、液体转移和固定步骤。通过简单的“添加和读取”模式，在细胞裂解的同一孔中完成抗体结合和发光反应，整个过程在2小时内。
在此，我们利用Lumit®成功评估了针对众多靶点（包括受体酪氨酸激酶）的磷酸化抑制剂的效力和选择性，使用的裂解试剂包括标准的Lumit®裂解试剂、digitonin或新开发的裂解缓冲液。尽管digitonin对于广泛的细胞蛋白靶点仍然有效，但Lumit®裂解缓冲液II改进了某些已建立检测的性能，并可以对新的蛋白靶点进行检测。我们还在多种细胞系中检测了PROTAC降解剂相应多个靶点的降解情况。此外，我们通过高通量筛选（HTS）兼容的体积和格式，鉴定出能调节 phospho-STAT3水平的化合物，展示了该检测在HTS设置中的灵活性。这些结果证明了Lumit®免疫测定法在研究信号通路、鉴定特异性抑制剂和降解剂方面的广泛应用潜力。
应用数据展示
01
Lumit® Immunoassay Cellular Systems检测总的与磷酸化的靶蛋白
● Lumit® 基于细胞的免疫测定能够揭示经配体介导激活后信号通路的预期生物学效应。
● Lumit® 测定能够检测信号通路对于激酶抑制剂处理的预期响应，从而验证药物作用机制。
02
新型Lumit®裂解缓冲液II使更多蛋白靶点的检测成为可能
● Lumit® 裂解缓冲液II使得包括受体酪氨酸激酶（RTKs）在内的新蛋白质靶点的检测成为可能，并提高了某些已建立检测的性能。
● Digitonin 对广泛的细胞蛋白靶点仍显示出高效性。
● Lumit® 裂解缓冲液II可能与某些检测不兼容，因此Digitonin仍然是 Lumit® Immunoassay Cellular Systems中一个重要的组成部分。
03
在EGFR野生型与突变细胞系中检测p-EGFR及抑制剂分析
● Lumit® 技术可利用特定位点的抗磷酸酪氨酸或泛抗酪氨酸抗体来检测EGFR在多个酪氨酸残基上的磷酸化水平。
● Lumit® p-EGFR检测能够确定各种野生型和突变细胞系中EGFR抑制剂的效能排序。
04
Lumit®细胞免疫测定作为靶向蛋白降解（TPD）工作流程的一部分
靶向蛋白降解（TPD）工作流程
● Lumit® 基于细胞的免疫测定能够检测到响应PROTAC处理的目标蛋白的预期降解。
● Lumit® ICS可用于TPD应用中多种蛋白质靶标的检测。
05
检测PROTAC介导的内源性目标蛋白降解
● Lumit® ICS展示了在多种非工程化细胞系中测试PROTACs的优势。
● 观察到不同细胞系间DC50（半最大降解浓度）的变动。
06
使用Lumit® pSTAT3筛选获FDA批准的化合物，结果得到了预期的JAK抑制剂
● 优化384孔板中35μL处理细胞的STAT3抗体条件。
● 在384孔板中，降低p-STAT3检测用抗体的浓度能在不牺牲最大信号强度的前提下，获得更高的信噪比。
参考文献：
1. Hwang, B., et al. (2020). Commun Biol 3, 8 https://rdcu.be/b0jf0
2. Swiatnicki et al. (2022) SLAS Discovery 27(4):249-257.
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2472555222125177?via%3Dihub
技术资源
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GPCR研究与药物研发
工具列表（简版）
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