利用针对不同AAV血清型的AAV-NanoLuc^®-HaloTag^®报告基因进行转导，可测量转导时不同AAV血清型对不同细胞系的选择性。如转导成功，表达的NanoLuc^®萤光素酶将在有底物的情况下产生发光信号。由此产生的发光信号强度与AAV的转导效率成正比。

NanoLuc^®Luciferase Assay实验流程：

NanoLuc^®Luciferase Assay操作简单，能够快速、灵敏地检测AAV血清型的细胞嗜性。

 数据展示：

不同血清型的细胞嗜性发光检测

AAV-NanoLuc®-HaloTag®报告基因对不同细胞系的选择性。使用分别对应AAV血清型1-10的AAV-NanoLuc®-HaloTag®报告基因检测不同组织类型的细胞系。对每种类型的细胞用对应各AAV血清型的报告基因以1000的MOI进行转导。加入底物后，测量表达NanoLuc®萤光素酶的感染细胞的发光信号。信号强度与AAV的转导效率成正比。

AAV2-NanoLuc^®-HaloTag^®报告基因转导细胞的荧光成像

加入Janelia Fluor®Halo Tag®646 Ligand	与DNA染色（蓝色）叠加

对AAV感染细胞进行荧光成像。用AAV2-NanoLuc^®-HaloTag^®报告基因转导U2OS细胞。转导48小时后，加入Janelia Fluor^®HaloTag^®646 Ligand与细胞共孵育。使用Keyence显微镜拍摄图像。表达HaloTag^®蛋白的细胞为红色，DNA染色为蓝色。

使用流式细胞仪测定AAV阳性细胞数

使用流式细胞仪对AAV阳性细胞进行量化。用AAV-NanoLuc^®-HaloTag^®报告基因（AAV1-AAV10）感染U2OS细胞，MOI为100000。转导48小时后，用Janelia Fluor^®HaloTag^®646 Ligand标记细胞，并使用流式细胞仪测量细胞数。

使用NanoLuc^®萤光素酶检测体内嗜性和生物分布

NanoLuc®萤光素酶和Nano-Glo®Fluorofurimazine In Vivo Substrate（FFz）为利用AAV进行体内生物分布研究提供了新的报告基因选择。Nano-Glo®FFz Substrate是一种水溶性检测试剂，专门针对NanoLuc®萤光素酶的体内检测进行了优化，其具有较高的底物生物利用率，可产生明亮、稳定的信号。Nano-Glo®FFz的处理要求与体内实验流程相兼容，提供灵活的传递选择，其底物的特异性使得NanoLuc®和萤火虫萤光素酶可以同时用于双萤光素酶成像研究。

NanoLuc^®AAV的组织嗜性（体内生物分布）数据

注射了AAV9-NanoLuc®-HaloTag®病毒颗粒的小鼠体内全身成像。将浓度逐渐升高的AAV9-NanoLuc®-HaloTag®病毒颗粒注射入小鼠体内。转导7天和13天后，注射Nano-Glo®FFz（0.44μmoles），然后进行体内成像。转导7天后，组织嗜性开始出现；13天后，组织嗜性产生的信号更强，分布更广泛。生物发光成像在威斯康星大学的小动物成像和放射治疗机构完成。

我们提供快速（约5小时）、高通量的DNA提取和定量实验方案，使您能够在不同组织中检测并定量AAV病毒基因组。

脑组织中AAV拷贝数的ddPCR结果。将不同浓度水平的AAV9-NanoLuc®-HaloTag®病毒颗粒注射入小鼠体内。注射14天后，收集组织并从中提取DNA。使用ITR和TERT（管家基因对照）引物和探针进行ddPCR扩增。	肝组织中AAV拷贝数的ddPCR结果。将不同浓度水平的AAV9-NanoLuc®-HaloTag®病毒颗粒注射入小鼠体内。注射14天后，收集组织并从中提取DNA。使用ITR和TERT（管家基因对照）引物和探针进行ddPCR扩增。