检测NLRP3炎性小体激活的方法
传统方法
1. 显微镜检查
传统的免疫荧光染色技术使用特定的抗ASC抗体标记ASC斑点,以测量炎性小体的激活。虽然这种方法对于可视化ASC斑点蛋白的表达和定位很有用,但染色耗时长,需要多次洗涤步骤,而且不太适合高通量应用。
2. 酶联免疫吸附测定(ELISA)
ELISA试剂盒用于量化炎性小体的激活,通常检测成熟形式的促炎细胞因子IL-1β和IL-18,或者分泌的HMGB1。但ELISA试剂盒仅检测蛋白质的存在,而不体现其激活状态,并且ELIASA耗时长,需要许多孵育和洗涤步骤,气线性范围也非常有限,样品通常需要稀释才能在适当范围内被检测到。
3. Western blot 和 Pull-down实验
Western blot被频繁用于评估通过加工促炎细胞因子(包括IL-1β和IL-18)以及Gasdermin D和其他各种caspases来实现的炎性小体激活。Western blot和Pull-down实验操作非常繁琐,需要针对感兴趣蛋白的特定一抗,是无法定量的。
更简便的监测炎性小体激活的方法
Promega提供了一系列可高通量且无需洗涤的简单的检测炎性小体激活的方法。
