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RAS通路
RAS Pathway
选择合适的检测方法对RAS信号通路药物开发研究非常重要。Promega可为您提供多种检测试剂盒和先进技术来助力RAS药物的研发。这些检测试剂盒可检测化合物与通路组分的结合，并评估它们对蛋白质相互作用、蛋白质水平以及最终ERK激活的影响。
靶标占据
Target Engagement
NanoBRET® 技术提供了灵敏、高特异性的方法来检测小分子药物与其靶蛋白在活细胞中的相互作用。使用NanoBRET® Target Engagement Assay，您可以：
- 定量检测活细胞中的化合物亲和力（与蛋白质结合的紧密程度）以及对靶蛋白的占有率（与蛋白质结合的量）。
- 评估化合物在生理条件下与靶蛋白结合的时间（其滞留时间）。
- 规模扩展简单、多孔板模式的检测，以满足您的研究通量需求。
- 生成具有低错误率和高重现性的高质量数据。
- 可使用即用型检测试剂盒快速入门。
NanoBRET™Target Engagement Assay的技术原理
测量细胞内 RAS 复合物的 TE
NanoBRET® TE Intracellular RAS Assay 是即用型检测试剂盒，可以检测细胞内化合物与RAS蛋白的结合，以定量多种RAS变体（包括 KRAS、HRAS 和相关热门突变体）的化合物亲和力和占有率。利用 NanoLuc® Binary Technology (NanoBiT) 二元互补技术来创建能量供体，可以检测多聚体 RAS 复合物上的细胞内靶标占据，从而更准确地反映 RAS 生物学。可以测量单个RAS复合物的占据情况，也可以分析化合物在众多RAS变体上的选择性。
上图. 跨 RAS 变体的化合物选择性。 NanoBRET® TE RAS Assay允许使用相同的工作流程和一致的示踪剂浓度（2 μM ）对测试化合物在多种 RAS 变体的选择性进行评估。此处显示的是 Sotorasib（图 A）和 MRTX1133（图 B）在整套可用的RAS融合载体中的选择性分析曲线的示例。Sotorasib 对 G12C 热点 RAS 突变体表现出很强的选择性，同时 MRTX1133 有效占据其预期靶标 KRAS（G12D） 和许多其他 KRAS 变体。
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| | 代表性文献 这篇发表在《Nature Chemical Biology》上的文章中，我们研究了KRAS小分子抑制剂的可逆结合，以评估哪些热点突变体易受细胞中switch-IIpocket(SII-P)结合的影响。我们发现许多KRAS热点突变体的SII-Ps可以通过非共价配体与之结合。我们的结果强调SII-P是KRAS上的一个特殊药物结合位点，揭示了RAS驱动癌症的新的治疗机会。 |  |
条件定量 RAF PPI 二聚体的 TE
NanoBRET® TE Intracellular RAF Dimer Assay试剂盒可测量全长 ARAF、BRAF 和 CRAF 二聚体的细胞内化合物结合亲和力和占有率。利用 NanoBiT® complementation产生能量供体，可以检测RAF 同源二聚体或 RAF 异二聚体内特定 RAF 原聚体处的化合物靶标结合。
上图. 化合物在多种RAF配置中的活性。 NanoBRET® TE Intracellular RAF Dimer Assays可用于使用相似的工作流程评估多种 RAF 配置的测试化合物活性。此处显示的是 RAF 二聚体抑制剂 TAK-632（图 A）和 LXH254（图 B）的活性谱示例。两种抑制剂都可以结合所有 RAF 二聚体，但两种化合物对同型二聚体内的 CRAF 和 ARAF 原聚体的亲和力较弱。
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| | 代表性文献 RAF 二聚体抑制剂通过靶向 RAS-RAF 复合物中的 RAF 原聚体，在治疗 RAS 驱动的癌症方面显示出前景。在本文中，了解一种新方法如何量化活性 RAS-RAF 复合物中的药物占有率，从而帮助评估抑制剂。临床 II 型 RAF 抑制剂主要与 ARAF 原聚体结合，影响突变 RAS 细胞系中的 MAPK 信号转导，揭示了 ARAF 的关键作用。 | |
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